病毒性出血性败血症病毒（VHSV）RNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
试剂简介：
一、试剂盒核心信息
检测目标
特异性检测病毒性出血性败血症病毒（Viral Hemorrhagic Septicemia Virus, VHSV）的RNA，靶向糖蛋白（G）基因（基因型I-IV通用检测）及核蛋白（N）基因（分型辅助）。
覆盖宿主：鲑鳟鱼类（如虹鳟）、海水鱼（如鲈鱼）、淡水鱼（如鲤鱼）。
产品名称 | 病毒性出血性败血症病毒（VHSV）RNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1571 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
方法原理
荧光RT-PCR：
采用TaqMan探针（FAM标记G基因，HEX标记N基因），内标（Cy5）监控提取与扩增。
一步法逆转录与扩增，灵敏度达10拷贝/μL，较传统细胞培养法（7天）缩短至2小时。
适用样本
病鱼肝/脾/肾组织、鱼卵、水体（需0.45μm滤膜富集病毒）。
二、试剂盒组分与操作流程
1. 核心组分
组分 功能说明
RT-PCR预混液 含逆转录酶、热启动Taq酶、dNTPs（抗鱼类组织抑制物优化）。
探针引物混合液 G基因-FAM/N基因-HEX探针，内标（鱼类β-actin基因，Cy5标记）。
阳性对照 灭活VHSV-IVb型RNA（标准株F1-007）。
核酸提取试剂 磁珠法（含载体RNA防降解，适配高脂样本）。
2. 操作步骤
样本处理：
组织样本：50mg匀浆+PBS离心取上清。
水体样本：滤膜浓缩后裂解。
PCR扩增（25μL体系）：
50℃ 15min（RT）→ 95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles
三、性能与结果解读
1. 关键参数
指标 性能要求
灵敏度 10拷贝/反应（纯RNA）
特异性 不与IHNV（传染性造血器官坏死病毒）交叉
抗干扰性 耐受15%肝组织匀浆或水体腐殖酸
2. 结果判读
阳性：
G基因（FAM）Ct≤35 → VHSV感染。
N基因（HEX）Ct≤35 + 熔解曲线 → 基因型鉴别（如IVb型熔解峰82℃）。
无效检测：内标（Cy5）无扩增 → 需复查采样或提取步骤。
四、注意事项
采样时效性
急性期病鱼（体表出血、鳃苍白）检出率最高，死亡＞24小时样本可能假阴性。
生物安全
VHSV属OIE须申报病原，实验废弃物需121℃高压灭菌。
局限性
不能区分疫苗株（如DNA疫苗）与野生株。
五、应用场景
养殖场防控：早期预警，减少鱼类大规模死亡（死亡率可达90%）。
进出口检疫：符合OIE《水生动物卫生法典》检测要求。
生态监测：野生鱼类种群VHSV携带率调查。
公司正在出售的产品：
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间隙连接蛋白10抗体 | PE标记大鼠CD8a单克隆抗体 |
关键字： 病毒性出血性败血症病毒;检测试剂盒;PCR-荧光探针法;
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