技术原理
本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术，基于TaqMan探针原理设计。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性会切割与靶序列结合的探针，使报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。通过实时监测荧光强度变化，实现对西洋参DNA的定性和定量分析。
产品名称 | 西洋参探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Panacis Quinquefolii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4947 |
产品组成
探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）
探针法qRT-PCR酶混合液（100μL）
荧光PCR专用模板稀释液（1mL）
西洋参探针法qRT-PCR引物混合液（100μL）
西洋参qRT-PCR探针（50μL）
西洋参探针法qRT-PCR阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，50μL）
产品说明书（1份）
实验前准备
自备试剂：样品DNA/RNA、无核酸酶水、RNase-free离心管和枪头
仪器设备：荧光定量PCR仪、离心机、冰盒、涡旋振荡器
实验分区：建议在独立区域进行样品制备、试剂配制和PCR扩增
标准曲线制备
标记6个离心管为2-7号
每管加入45μL模板稀释液
7号管加入5μL阳性对照，震荡混匀得10⁷拷贝/μL标准品
依次10倍稀释至2号管（10²拷贝/μL）
所有标准品置于冰上备用
样品DNA制备
使用核酸提取试剂盒提取样品DNA
建议设置N+2个样品（含阳性对照和阴性对照）
阳性对照：10μL阳性对照的10000倍稀释液
阴性对照：使用无核酸酶水
PCR反应体系
20μL反应体系：
探针法qRT-PCR缓冲液：10μL
探针法qRT-PCR酶混合液：2μL
西洋参qRT-PCR探针：1μL
引物混合液：2μL
样品DNA模板：5μL
PCR反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 15sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1min | 40 |
| 信号采集 | 60℃ | - | - |
结果分析
定量分析
以标准品浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线
根据样品Ct值计算初始模板量
定性分析
阴性对照：Ct≥40
阳性对照：Ct≤30且有典型扩增曲线
待测样品：
Ct≤35：阳性
Ct≥40：阴性
35<Ct<40：需重复检测
注意事项
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断
操作全程注意避免污染，建议使用带滤芯枪头
试剂解冻后应充分混匀并短暂离心
阳性对照需单独存放，避免污染其他组分
反应体系配制应在冰上进行
不同PCR仪器可能需要调整反应参数
性能参数
灵敏度：可检测至10²拷贝/μL
特异性：引物针对西洋参高度保守区设计，不与常见微生物发生交叉反应
线性范围：10²-10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）
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