荷叶探针法PCR鉴定试剂盒

荷叶探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法实时荧光定量PCR（qPCR）技术，专用于荷叶（Folium nelumbinis）的核酸特异性检测。通过针对荷叶保守基因序列设计的引物及探针，结合荧光信号实时监测，实现高灵敏度、高特异性的定性或定量分析。适用于科研领域，不可用于临床诊断。

技术原理

探针法qPCR原理：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

检测流程：

反转录（若检测RNA）：将RNA逆转录为cDNA。

扩增与检测：通过40个循环的变性（94℃）、退火（60℃）、延伸（72℃），实时采集荧光信号。

产品组成

| 成分 | 规格/数量 | 保存条件 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL | -20℃ |

| 酶混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 荧光探针 | 50 μL | -20℃ |

| 引物混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |

| 模板稀释液 | 1 mL | 室温 |

实验步骤

标准曲线制备（定量分析需用）：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度设复孔。

样本处理：

提取待测样本DNA/RNA，避免反复冻融。

阴性对照（水）与阳性对照（试剂盒提供）需同步设置。

反应体系（20 μL）：

qPCR缓冲液 10 μL + 酶混合液 2 μL + 探针 1 μL + 引物混合液 2 μL + 模板5 μL。

PCR程序：

50℃ 30 min（反转录）→ 94℃ 10 min（预变性）→ 40循环（94℃ 15 sec, 60℃ 1 min，采集荧光）。

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（Ct 35~40）：需复测确认。

注意事项

样本要求：

避免使用降解DNA/RNA，推荐保存于液氮、Trizol或-80℃。

污染控制：

分装试剂，避免反复冻融；操作分区（样本制备、PCR扩增）。

局限性：

仅限科研用途，需结合其他鉴定方法（如测序）验证结果。

储存与运输

保存：-20℃避光，有效期12个月。

运输：低温干冰或冰袋运输。

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