产品特点
即开即用：用户仅需提供DNA模板，试剂盒预混优化组分（含缓冲液、酶、引物及探针）。
高灵敏度与特异性：引物及探针针对侧柏叶保守序列设计，无交叉反应，检测限低至10拷贝/μL。
双重应用：支持定性与定量检测，定量线性范围达5个数量级（10^1-10^6拷贝/μL）。
质控完善：含阳性对照（10^7拷贝/μL无传染性DNA片段）及阴性对照，有效区分假阴性。
操作便捷：含上样染料，PCR产物可直接电泳；探针法采用FAM通道荧光信号采集。
产品名称 | 侧柏叶探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Cacumen Platycladi Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5175 |
试剂盒组分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50次反应 |
| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL |
| 试剂六 | 使用手册 | 1份 |
操作流程
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记6管（6-1号），每管加45μL稀释液。
6号管加入5μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡混匀得10^6拷贝/μL标准品，依次稀释至10^1拷贝/μL。
2. 样品DNA提取
建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），兼容常规DNA提取试剂盒。
3. qPCR反应体系（20μL/管）
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qPCR缓冲液（试剂一） | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液（试剂二） | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探针（试剂四） | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液（试剂四） | 2μL | 2μL | 2μL |
| DNA模板 | 5μL | - | - |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
| 标准品 | - | - | 5μL |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30 min（若含RNA步骤）；
预变性：94℃ 10 min；
扩增：40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤39，扩增曲线典型；
阴性：Ct≥40或无信号；
可疑：39<Ct<40，需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需独立区域，避免交叉污染。
质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36。
保存与运输：-20℃避光保存，低温运输；避免反复冻融。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异影响定量准确性。
声明：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。
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