榧子探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 榧子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Torreyae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5127 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR技术（qPCR），通过探针法实现高特异性检测：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针与靶序列结合时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的实时变化（Ct值），计算起始模板浓度。
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对Semen torreyae保守区设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品核酸（RNA/DNA）。
质控完善：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，非传染性DNA片段）及阴性对照。
应用范围：科研用途（不可用于临床），支持定性与定量检测（线性范围5-7个数量级）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格（每盒） |
| qPCR预混缓冲液 | 500 μL |
| 逆转录酶/聚合酶混合液 | 100 μL |
| 荧光探针 | 50 μL（避光保存） |
| 引物混合液 | 100 μL |
| 阳性对照 | 50 μL（1×10⁸拷贝/μL）|
| 模板稀释液 | 1 mL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记离心管（7至2号），依次稀释阳性对照至10²-10⁷拷贝/μL，冰上保存。
2. 样品核酸提取
建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的RNA/DNA提取试剂盒纯化。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| 预混缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 模板（样品/标准品） | 5 | - | 5（对应梯度） |
| 超纯水 | - | 5 | - |
4. 反应程序
逆转录（若适用）：50℃ 30 min
预变性：94℃ 3-10 min
扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性判定：
阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；阴性：Ct ≥ 40。
灰区（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：核酸提取、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免污染。
质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。
安全规范：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁台面及器材。
禁用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。
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