莪术探针法PCR鉴定试剂盒

莪术探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：荧光强度与扩增产物量成正比，通过标准曲线计算模板初始浓度。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 酶混合液（含逆转录酶） | 100 μL |

| 莪术特异性引物混合液 | 100 μL |

| 荧光探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

| 模板稀释液 | 1 mL |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），冰上操作避免污染。

2. RNA提取

建议使用柱式RNA提取试剂盒，阴性对照（NC）设超纯水，阳性对照（PC）为稀释后的标准品。

3. PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板RNA | 5 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

结果判读

定量分析：以Ct值为纵轴，标准品log浓度为横轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需复测。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

探针避光保存，反复冻融≤3次。

阳性对照需最后加入，防止交叉污染。

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