技术原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现白术的特异性鉴定：
探针设计：探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当Taq酶切割探针时，荧光信号释放并被检测。
扩增与检测：通过实时监测荧光信号强度，定量分析起始模板浓度，兼具高灵敏度和特异性。
产品名称 | 白术探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Rhizoma Atractylodis Macrocephalae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5195 |
产品组成
| 成分 | 规格/说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL（预混反应液） |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶、Taq酶等） |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（用于标准曲线稀释） |
| 引物混合液 | 100μL（白术特异性引物） |
| 探针 | 50μL（标记荧光基团） |
| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL，无传染性DNA片段） |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样品RNA提取
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），使用兼容的RNA提取试剂盒。
3. qRT-PCR反应（20μL体系）
按比例加入缓冲液、酶、引物、探针及模板，上机运行以下程序：
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增：40循环（94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟，采集FAM信号）
4. 数据分析
定量分析：以Ct值绘制标准曲线，计算样品浓度。
定性分析：Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性，35~40需复测。
注意事项
防污染：分区操作（样品制备、试剂配制、扩增），使用带滤芯枪头。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
质量控制：阴性对照无扩增（Ct≥40），阳性对照Ct≤30。
适用范围：仅适用于白术RNA的科研鉴定，不可用于临床或诊断。
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