鸡星状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

鸡星状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光PCR技术，用于检测鸡星状病毒（CAstV）核酸，适用于科研用途（如流行病学调查、病毒载量分析），不适用于临床诊断。

检验原理

通过设计CAstV基因保守区域的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现核酸的定性与定量分析。

包装规格

试剂一：探针法qPCR缓冲液（500μL）

试剂二：探针法qPCR酶混合液（50μL）

试剂三：荧光PCR专用模板稀释液（1mL）

试剂四：PCR引物-探针干粉（50次反应）

试剂五：阳性对照（10^7拷贝/μL，50μL）

其他：阴性对照（50μL）

操作步骤

标准曲线制备

用阳性对照进行10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

样本DNA提取

建议使用商品化DNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照。

qPCR反应体系（20μL）

反应液配制：

qPCR缓冲液：10μL

酶混合液：2μL

探针及引物：各1μL/2μL

模板DNA：5μL

程序设置：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环扩增：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）

结果判读

定量分析：通过标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct≤39，且有典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40或无扩增；

可疑结果（39<Ct<40）需复测。

性能指标

灵敏度：最低检测限1.0×10^3拷贝/mL。

特异性：不与常见禽类病原体交叉反应。

精密度：批内/批间CV≤3%。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，试剂避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

实验废弃物需按生物危害物处理（如10%次氯酸消毒）。

储存与运输

-20℃避光保存，有效期12个月；运输需冰袋（2–8℃）。

局限性

检测结果受样本质量、提取方法及操作规范影响。

基因变异可能导致假阴性；污染可能导致假阳性。

公司正在出售的产品