产品用途
科研用途，适用于垂盆草RNA的定性及定量检测，严禁用于临床。
产品名称 | 垂盆草探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Sedi Sarmentosi Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5158 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
信号检测：扩增过程中荧光强度与产物量成正比，通过Ct值定量起始模板浓度。
高特异性：引物及探针针对垂盆草保守序列设计，避免交叉反应。
试剂盒组成
| 成分 | 规格/含量 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL（1×浓度） |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶）|
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 垂盆草引物混合液 | 100μL |
| 垂盆草探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记离心管（7-2号），依次稀释阳性对照至10²~10⁷拷贝/μL，冰上保存。
2. RNA提取
建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。
兼容柱式或磁珠法RNA提取试剂盒。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| RNA模板 | 5 | - | - |
| 超纯水 | - | 5 | - |
| 标准曲线稀释液 | - | - | 5（对应梯度） |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤35，扩增曲线明显；
阴性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
探针避光：避免反复冻融，短暂离心后使用。
废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及仪器。
声明：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。
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