产品基本信息
规格：50次/盒（20μL反应体系）
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。
运输条件：低温冰袋运输，避免高温或强光暴露。
产品名称 | 草乌探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Aconiti Kusnezoffii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5176 |
产品组成
探针法qPCR缓冲液（500μL）
qPCR酶混合液（50μL，含热启动DNA聚合酶）
荧光PCR模板稀释液（1mL）
引物-探针干粉（50T，针对草乌特异性基因序列）
阳性对照（50μL，10^7拷贝/μL，无传染性DNA片段）
阴性对照（无核酸水）
实验步骤
（一）标准曲线制备（定量分析需6个稀释梯度）
标记离心管（6管，对应10^1–10^6拷贝/μL梯度）。
每管加入45μL稀释液，依次梯度稀释阳性对照（5μL转移），涡旋混匀后冰浴备用。
（二）样本DNA提取
推荐使用柱式DNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本量）。
（三）qPCR反应体系（20μL/管）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 1 |
| 引物-探针混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 无核酸水 | 补至20 |
（四）PCR程序（需优化仪器参数）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 60 sec | 40 |
| 信号采集 | FAM通道 | 每循环采集 | - |
数据分析
定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤36（需复测36<Ct<40的样本）。
注意事项
分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需分区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异或运输不当可能影响结果准确性。
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