产品原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。荧光强度与扩增产物量成正比，实现靶序列的实时定量检测。
保存条件：-20℃避光保存，保质期12个月
用途：专用于北沙参（Radix Glehniae）核酸的定性及定量检测，仅限科研使用。
产品名称 | 北沙参探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Glehniae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5187 |
产品组成
| 成分 | 规格/含量 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL |
| qPCR酶混合液 | 100 μL（含逆转录酶） |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 北沙参引物混合液 | 100 μL（特异性引物对） |
| 北沙参探针 | 50 μL（FAM标记） |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |
| 说明书 | 1份 |
技术参数
灵敏度：最低检测限可达10²拷贝/μL。
特异性：引物及探针针对北沙参保守序列设计，无交叉反应。
线性范围：10²~10⁷拷贝/μL（标准曲线R²≥0.99）。
扩增效率：90%~110%。
操作步骤
1. 样本制备
RNA提取：使用柱式法或自选试剂盒提取样本RNA，建议设置阴性/阳性对照。
标准曲线稀释：将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL）。
2. qPCR反应体系（20 μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
| 超纯水 | 补至20 |
3. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40个循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
结果判读
定量分析：以Ct值为纵轴，标准品log拷贝数为横轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。
可疑：35<Ct<40，需复测。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
实验分区操作，避免气溶胶污染。
试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。
阳性对照需单独存放，避免反复冻融。
本产品仅限科研用途，不可用于临床诊断。
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