貉源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 貉源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Raccoon Dog-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5344 |
检测原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶切割探针，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。
双重检测：部分含内参基因（如18S rRNA）引物探针，监控样本质量及扩增效率，避免假阴性。
产品组成
| 组分 | 规格/含量 | 功能说明 |
| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 热启动DNA聚合酶 | 25-100μL | 催化扩增反应 |
| 貉特异性引物/探针 | 100μL（引物）、50μL（探针） | 靶向貉保守基因序列 |
| 阳性质控品 | 1×10^8拷贝/μL DNA片段 | 标准曲线制备及实验质控 |
| 阴性质控品 | 无靶标缓冲液 | 排除污染及非特异性扩增 |
| 模板稀释液 | 1 mL | 标准品梯度稀释 |
性能参数
灵敏度：≤10拷贝/μL貉DNA。
特异性：不与狐狸、犬科其他物种交叉反应。
线性范围：10^2~10^6拷贝/μL（定量检测）。
适用样本：动物组织、肉制品、饲料等（需提取RNA/DNA）。
操作步骤
1. 样本准备
提取样本RNA/DNA（建议浓度≥10 ng/μL）。
设置阴/阳性对照（N+2原则）。
2. 反应体系配置（20μL体系）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 貉特异性探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA/阳性对照 | 5 |
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增循环（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM信号） |
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct值≤38且扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值＞38或无扩增。
注意事项
分区操作：严格区分试剂配制区、样本处理区及扩增区。
质控要求：每批次需包含阴阳性对照。
安全提示：废弃反应管按生物危害废物处理。
应用限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪：ABI 7500、Bio-Rad CFX、LightCycler等。
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