产品信息：
1. 细胞基本特性与背景
构建方式： 通过慢病毒或逆转录病毒载体，将 hTERT 基因导入原代人瓣膜间质细胞（PVIC），激活端粒酶活性，从而实现细胞永生化。
细胞类型： 成纤维细胞样/间质细胞。
生长特性： 贴壁生长。
组织来源： 通常源自人主动脉瓣或二尖瓣的间质组织。
应用领域： 仅限科研使用，主要用于心脏瓣膜钙化机制研究、纤维化研究及药物筛选。
产品名称 | 人瓣膜间质细胞永生化;PVIC-HTERT | 英文名称 | PVIC-HTERT：PVICHTERT |
货号 | AXB10646 | 生长特性 | 贴壁生长 |
用途 | 仅用于科研 实验 | 种属 | 人 |
培养条件与完全培养基配置
PVIC-HTERT 细胞的培养条件相对标准，通常使用高糖 DMEM 或专用培养基。
基础培养基： DMEM（高糖）或 专用间质细胞培养基。
添加成分：
胎牛血清 (FBS)： 10% - 20%（具体比例视生长状态而定，建议参考供应商说明书）。
双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%。
生长因子： 部分专用培养基可能需要添加 FGF（成纤维细胞生长因子）等。
培养环境：
温度： 37℃。
气相： 5% CO，95% 空气。
湿度： 饱和湿度。
详细培养操作指南
细胞复苏
快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。
稀释离心： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。
重悬接种： 弃去上清，加入适量完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。
静置培养： 次日观察细胞贴壁情况，建议更换新鲜培养基以去除残留的 DMSO。
细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）
弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-3 分钟。
注意：PVIC-HTERT 细胞贴壁较牢，且呈梭形，消化时需在显微镜下观察，待细胞回缩变圆、间隙变大时进行吹打。
终止消化： 加入含血清的培养基终止消化。
离心分瓶： 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例分装传代。
细胞冻存
收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。
冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。
程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。
关键注意事项（必读）
贴壁较牢与形态：
永生化后的瓣膜间质细胞通常呈长梭形或星形。它们贴附在瓶壁上比较牢固，传代时需要稍长的消化时间，但也要避免过度消化导致细胞损伤。
成骨诱导能力：
作为研究瓣膜钙化的模型，PVIC-HTERT 保留了向成骨细胞样表型转化的能力。在进行钙化诱导实验时（如添加β-甘油磷酸钠、地塞米松等），细胞会逐渐出现钙结节（可用茜素红染色验证）。
支原体检测：
由于是永生化细胞系，长期传代容易发生支原体污染，建议定期检测。
应用场景：
该细胞系主要用于替代原代细胞进行长期的机制研究，特别是研究TGF-β信号通路、Wnt信号通路及炎症因子对瓣膜钙化的影响。
总结
PVIC-HTERT 是研究心脏瓣膜疾病（特别是钙化）的有力工具。它解决了原代细胞寿命短的痛点。培养它的核心在于耐心消化（因为贴壁较牢）和维持稳定的传代密度。只要掌握好这两点，它就能为你提供稳定且可重复的实验数据。
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细胞类型与特性原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。
细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。
细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。
根据生长方式分为：
贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。
悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。
半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。
关键字： PVIC-HTERT;人瓣膜间质细胞永生化;贴壁细胞;
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