检测目标
靶基因：
ureC基因（尿素酶亚基，属特异性标志）
rpoB基因（种水平鉴别，如P. mirabilis vs P. vulgaris）
覆盖病原种：
临床常见种：奇异变形杆菌（P. mirabilis）、普通变形杆菌（P. vulgaris）
耐药株检测：携带blaCTX-M或blaNDM的ESBLs菌株
方法原理
双重荧光PCR：
ureC-FAM探针（通用检测） + rpoB-HEX探针（分型），内标（Cy5）监控全程。
采用抗抑制剂聚合酶，适配尿液、伤口分泌物等高复杂样本。
适用样本
临床：中段尿（UTI患者）、伤口拭子、血液（败血症）
环境：医院污水、导管表面生物膜
二、试剂盒组分与操作
1. 核心组分
组分 功能说明
PCR预混液 含热启动Taq酶、dUTP/UNG防污染系统
探针引物混合液 ureC-FAM/rpoB-HEX探针，内标（VIC标记）
阳性对照 灭活P. mirabilis ATCC 29906株DNA
核酸提取试剂 磁珠法（含尿素酶抑制剂，防假阴性）
2. 操作流程（以尿液样本为例）
前处理：
5mL尿液离心（10,000g, 10min），沉淀重悬于裂解液。
PCR扩增（30μL体系）：
95℃ 5min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）
三、性能与结果解读
1. 关键参数
指标 性能要求
灵敏度 102 CFU/mL（直接尿液）
特异性 不与摩根菌、普罗威登斯菌交叉
抗干扰性 耐受5%血红蛋白或10%尿素
2. 结果判读
属阳性：ureC（FAM）Ct≤35 → 变形杆菌感染。
种鉴别：
rpoB（HEX）Ct≤35 + 熔解峰78℃ → P. mirabilis
rpoB（HEX）Ct≤35 + 熔解峰82℃ → P. vulgaris
四、注意事项
采样要求
UTI患者晨尿检出率最高，采样后2小时内处理（防尿素酶降解RNA）。
耐药检测
若临床疑似ESBLs感染，需补充blaCTX-M检测模块。
生物安全
生物膜样本需超声破碎后检测（BSL-2操作）。
五、应用场景
临床诊断：
复杂性尿路感染（如导管相关感染）的快速病原确认。
院感防控：
手术器械生物膜污染监测。
兽医领域：
禽类坏死性肠炎病原筛查。
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