检测目标
靶基因：
gltA基因（柠檬酸合成酶，属特异性标记）
ssrA基因（种水平鉴别，如B. henselae/B. quintana）
覆盖病原种：
临床常见种：汉赛巴尔通体（猫抓病）、五日热巴尔通体（战壕热）、杆菌状巴尔通体（卡里翁病）
新发种：B. rochalimae（旅行者发热相关）
方法原理
多重荧光PCR：
gltA-FAM探针（通用检测） + ssrA-HEX探针（分型），内标（Cy5标记人GAPDH基因）监控采样质量。
采用高灵敏度聚合酶，适配低菌血症样本（血液中菌量通常＜1 CFU/mL）。
适用样本
临床：全血（EDTA抗凝）、淋巴结穿刺液、心内膜赘生物
媒介：跳蚤/虱子匀浆液（传播媒介监测）
二、试剂盒组分与操作流程
1. 核心组分
组分 功能说明
PCR预混液 含热启动Taq酶、dUTP/UNG防污染系统
探针引物混合液 gltA-FAM/ssrA-HEX探针，内标（Cy5）
阳性对照 灭活B. henselae Houston-1株（ATCC 49882）与B. quintana Toulouse株混合DNA
核酸提取试剂 磁珠法（含红细胞裂解模块，适配全血样本）
2. 操作步骤（以全血为例）
样本处理：
1mL全血 + 2mL红细胞裂解液，离心后取白细胞层提取DNA。
PCR扩增（30μL体系）：
95℃ 5min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×45 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）
三、性能与结果解读
1. 关键参数
指标 性能标准
灵敏度 5拷贝/反应（纯DNA）
特异性 不与立克次体、布鲁氏菌交叉
抗干扰性 耐受10%血红蛋白或肝素抗凝剂
2. 结果判读
属阳性：gltA（FAM）Ct≤38 → 巴尔通体感染。
种鉴别：
ssrA（HEX）Ct≤38 + 熔解峰82℃ → B. henselae
ssrA（HEX）Ct≤38 + 熔解峰85℃ → B. quintana
四、注意事项
采样要求
发热期血液样本（菌血症高峰）检出率更高，建议采集3份不同时段样本。
生物安全
巴尔通体属BSL-2病原体，心内膜赘生物样本需超声破碎处理（防气溶胶）。
局限性
不能区分急性感染与既往感染（需结合IgM抗体检测）。
五、应用场景
临床诊断：
不明原因发热（FUO）伴淋巴结肿大的病因筛查。
兽医领域：
猫抓病宿主动物（家猫）带菌率调查。
公共卫生：
战壕热在无家可归者群体中的暴发监测。
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