H7N4 亚型禽流感病毒检测试剂盒
1. 产品概述与应用

产品名称: H7N4亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法/RT-PCR法)。
检测目标: 甲型流感病毒H7亚型中的H7N4特异性基因序列。
产品名称 | H7N4 亚型禽流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1660 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
主要应用:
兽医临床诊断: 检测家禽(鸡、鸭等)是否感染H7N4病毒。
环境监测: 检测活禽市场、养殖场环境样本(如粪便、污水)中的病毒。
科研用途: 病毒学研究、流行病学调查、疫苗研发等。
检测意义: H7亚型病毒具有变异快的特点,特异性检测有助于区分不同亚型,防止疫情扩散。
2. 检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法:
逆转录(RT): 将样本中的病毒RNA反转录成cDNA。
特异性扩增: 针对H7N4病毒的血凝素(HA)或神经氨酸酶(NA)基因保守区域设计特异性引物和探针。
荧光检测: 在PCR扩增过程中,荧光探针被切断,释放出荧光信号。通过实时监测荧光信号的增加,实现对病毒核酸的定性或定量检测。
3. 试剂盒组成

以常见的50次/盒规格为例,试剂盒通常包含以下组分:
组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明
PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 核心反应成分,通常已预混
酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增反应
阳性对照 1管 -20℃ 含H7N4基因片段的质粒或假病毒
阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水或缓冲液
说明书 1份 常温 操作指南及判读标准
4. 样本要求与操作流程

第一步:样本采集
样本类型:
拭子样本: 咽喉拭子、泄殖腔拭子。
组织样本: 肺、脾、气管等脏器组织。
液体样本: 粪便悬液、气管冲洗液。
保存: 采集后立即放入病毒采样管,2-8℃保存并尽快送检;长期保存需置于-70℃。
第二步:核酸提取
方法: 使用配套的病毒RNA提取试剂盒(如磁珠法或柱提法)。
注意: RNA极易降解,操作过程应在冰上进行,并使用无RNase的耗材。
第三步:PCR反应体系配制
解冻: 将反应液和酶液在冰上解冻,振荡混匀并瞬时离心。
配制: 按说明书比例混合反应液、酶液。
分装: 将混合液分装至PCR反应管中(通常为20μL体系)。
第四步:加样
向反应管中加入提取好的RNA模板(通常为5-10 μL)。
设置阴性对照和阳性对照。
第五步:上机扩增
仪器: ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等。
荧光通道: 选择 FAM 通道(报告基团)。
程序(参考):
逆转录: 42℃-50℃,10-15分钟(1个循环)。
预变性: 95℃,3-5分钟(1个循环)。
PCR循环: 95℃变性15秒,60℃退火/延伸30-45秒(采集荧光),共40-45个循环。
5. 结果判读标准

有效实验判定:
阴性对照(NC): 无Ct值(或Ct值 > 40),扩增曲线为直线。
阳性对照(PC): Ct值 ≤ 36,扩增曲线呈典型的“S”型。
样本结果判定:
阳性 (+): Ct值 ≤ 36,且扩增曲线呈明显的“S”型。表明样本中检测到H7N4亚型禽流感病毒核酸。
阴性 (-): Ct值 > 40 或 无Ct值。表明样本中未检测到H7N4亚型禽流感病毒。
可疑 (灰区): Ct值在 36-40之间。
建议:重新提取核酸或复测。若复测Ct值 < 40且曲线正常,则判为阳性;否则判为阴性。
6. 注意事项与生物安全

生物安全: 禽流感病毒属于传染性病原体,样本处理必须在生物安全二级(BSL-2)或以上实验室中进行。
防污染: PCR检测灵敏度极高,必须严格分区操作(试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区),防止气溶胶污染。
试剂稳定性: 酶混合液对温度敏感,应避免反复冻融,使用后立即放回-20℃保存。
仅限科研/检测: 大多数此类试剂盒标注仅用于科研或兽医临床辅助诊断,严禁用于临床医疗。
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