H7 亚型流感病毒检测试剂盒
1. 检测原理：
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法（Real-time RT-PCR）。
逆转录（RT）： 流感病毒是 RNA 病毒，试剂盒利用逆转录酶将样本中的病毒 RNA 逆转录成 cDNA。
特异性扩增： 针对 H7 亚型流感病毒的血凝素（HA）基因高度保守区域设计特异性引物和探针。
荧光检测： 在 PCR 扩增过程中，随着目的基因片段的扩增，荧光探针被切断，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的变化，通过扩增曲线和 Ct 值（循环阈值） 来判断样本中是否含有 H7 亚型病毒。
产品名称 | H7 亚型流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1662 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
2. 检测目标与应用
目标基因： 禽流感病毒 H7 亚型（AIV-H7）特异性基因片段。
应用领域：
动物防疫监测： 用于家禽养殖场、活禽交易市场的日常监测。
临床辅助诊断： 用于疑似禽流感感染禽类的病原学检测。
公共卫生应急： 用于监测 H7 亚型病毒（如 H7N9）向人的跨种传播风险。
样本类型： 咽喉拭子、泄殖腔拭子、血液、肺脏、脾脏等组织匀浆液。
3. 试剂盒组成（典型配置）
根据常见品牌的配置，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/含量 作用
RT-PCR 反应液 / Master Mix 1 mL x 1管 (红盖) 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
酶混合液 (Enzyme Mix) 100 μL x 1管 (红盖/黑盖) 含逆转录酶、热启动 Taq 酶
引物/探针混合液 100 μL x 1管 (白盖) 针对 H7 亚型特异性设计
阳性对照 (Positive Control) 50 μL x 1管 (黄盖) 含 H7 亚型靶基因的质粒 (1×10^8 拷贝/μL)
阴性对照 (Negative Control) 1 mL x 1管 (亮黄色/蓝盖) 无菌超纯水
说明书 1 份 操作指南和参数说明
注：部分试剂盒可能包含 ROX 参比染料，具体视仪器型号而定。
4. 操作流程简述
样本处理： 采集拭子或组织样本，使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒提取病毒 RNA。
试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数）混合反应液、酶和引物探针，分装到 PCR 管中。
加样： 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 RNA（样本、阴性对照、阳性对照）。
上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序：
逆转录： 50℃，15-30 分钟（部分一步法试剂盒可在此温度下进行）。
预变性： 95℃，5-10 分钟。
PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec（收集荧光），40-45 个循环。
结果判读标准：
阳性（+）：
扩增曲线呈典型的 S 型指数增长。
Ct 值 ≤ 35（或说明书设定的阈值，通常为 35-38）。
结论：样本中检出 H7 亚型流感病毒核酸。
阴性（-）：
无 Ct 值，或 Ct 值 > 35（或无扩增曲线）。
结论：样本中未检出 H7 亚型流感病毒核酸。
可疑（±）：
Ct 值在 35-40 之间。建议重新检测，若复检 Ct 值 < 40 且曲线正常，判为阳性。
实验有效性：
阳性对照： 必须有明显扩增（Ct 值在预期范围内，通常 < 30）。
阴性对照： 必须无扩增（无 Ct 值）。
6. 注意事项与局限性
防污染（重中之重）： PCR 检测极其灵敏，极易受气溶胶污染。严禁在检测区打开扩增后的 PCR 管盖。实验需严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区）进行。
试剂保存： 试剂盒通常需在 -20℃ 条件下避光保存。运输和使用过程中应尽量避免反复冻融，以免影响酶活性。
样本采集： 样本采集部位（如咽喉、泄殖腔）的准确性直接影响检测结果。样本若不能立即检测，应置于 -70℃ 保存，避免反复冻融导致 RNA 降解。
临床诊断： 本试剂盒仅用于临床辅助诊断，不作为确诊唯一依据。检测结果需结合禽类的临床症状、病理变化及其他检测结果综合判断。
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