H11 亚型流感病毒检测试剂盒
1. 检测原理：
产品名称 | H11 亚型流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1678 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法（Real-time RT-PCR）。
逆转录（RT）： 流感病毒是 RNA 病毒，试剂盒利用逆转录酶将样本中的病毒 RNA 逆转录成 cDNA。
特异性扩增： 针对 H11 亚型流感病毒的血凝素（HA）基因高度保守区域设计特异性引物和探针。
荧光检测： 在 PCR 扩增过程中，随着目的基因片段的扩增，荧光探针被切断，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的变化，通过扩增曲线和 Ct 值（循环阈值） 来判断样本中是否含有 H11 亚型病毒。
2. 检测目标与应用
目标基因： 甲型流感病毒 H11 亚型（IAV-H11）特异性基因片段。
应用领域：
动物疫病监测： 用于家禽（特别是鸭、鹅等水禽）养殖场的监测。
跨种传播研究： H11 病毒在猪和禽类中均有发现，可用于研究病毒的跨种传播机制。
公共卫生预警： 监测病毒是否发生变异并感染人类。
样本类型： 咽喉拭子、泄殖腔拭子、组织匀浆液等。
3. 试剂盒组成（典型配置）
根据科研及兽医诊断试剂品牌的配置，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/含量 作用
RT-PCR 反应液 1 mL x 1管 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
酶混合液 (Enzyme Mix) 100 μL x 1管 含逆转录酶、热启动 Taq 酶
阳性对照 (Positive Control) 50 μL x 1管 含 H11 亚型靶基因的质粒
阴性对照 (Negative Control) 1 mL x 1管 无菌超纯水
说明书 1 份 操作指南和参数说明
4. 操作流程简述
样本处理： 采集拭子或组织样本，使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒提取病毒 RNA。
试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数）混合反应液和酶，分装到 PCR 管中。
加样： 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 RNA（样本、阴性对照、阳性对照）。
上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序：
逆转录： 50℃，15-30 分钟。
预变性： 95℃，5-10 分钟。
PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec（收集荧光），40-45 个循环。
结果判读标准：
阳性（+）：
扩增曲线呈典型的 S 型指数增长。
Ct 值 ≤ 35（或说明书设定的阈值）。
结论：样本中检出 H11 亚型流感病毒核酸。
阴性（-）：
无 Ct 值，或 Ct 值 > 35。
结论：样本中未检出 H11 亚型流感病毒核酸。
实验有效性：
阳性对照： 必须有明显扩增（Ct 值在预期范围内）。
阴性对照： 必须无扩增。
6. 注意事项与局限性
防污染： PCR 检测极其灵敏，极易受气溶胶污染。严禁在检测区打开扩增后的 PCR 管盖。实验需严格分区操作。
试剂保存： 试剂盒通常需在 -20℃ 条件下避光保存。运输和使用过程中应尽量避免反复冻融，以免影响酶活性。
仅限兽医/科研： 该试剂盒主要用于动物源性样本检测，通常不用于人临床诊断，多用于兽医诊断或流行病学调查。
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