FluA/FluB/pdmH1N1(HA)/H3N2(HA) 亚型流感病毒检测试剂盒
1. 检测原理:
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法(Real-time RT-PCR),并采用多重 PCR 技术。
一步法检测: 利用逆转录酶将病毒 RNA 逆转录成 cDNA,随后在同一管内进行 PCR 扩增。
多重荧光标记: 针对不同病毒亚型的保守基因序列(如 M 基因、HA 基因)设计特异性引物和探针,并使用不同的荧光基团(如 FAM、VIC/HEX、CY5 等)进行标记。
同步分析: 仪器通过识别不同通道的荧光信号,实现对四种目标病毒的同步定性检测。
产品名称 | FluA/FluB/pdmH1N1(HA)/H3N2(HA) 亚型流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1686 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
2. 检测目标与应用
目标病原:
FluA(甲型通用): 检测所有甲型流感病毒(包括 H1N1、H3N2、H5N1 等)。
FluB(乙型通用): 检测所有乙型流感病毒。
pdmH1N1: 特异性检测 2009 年大流行株 H1N1(通常针对 HA 基因)。
H3N2: 特异性检测季节性 H3N2 亚型流感病毒(通常针对 HA 基因)。
应用领域:
临床辅助诊断: 用于医院发热门诊、呼吸科,快速鉴别患者感染的流感亚型。
流行病学监测: 监测不同流感亚型在人群中的流行趋势。
药物指导: 区分甲流和乙流,以及具体的亚型,有助于指导抗病毒药物(如奥司他韦)的使用。
样本类型: 人鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等。
3. 试剂盒组成(典型配置)
根据市场主流品牌的配置,试剂盒通常包含以下组分:
组分名称 规格/含量 作用
RT-PCR 反应液 1 mL x 1管 (红盖) 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
酶混合液 (Enzyme Mix) 100 μL x 1管 (红盖/黑盖) 含逆转录酶、热启动 Taq 酶
引物/探针混合液 100 μL x 1管 (白盖) 针对 FluA、FluB、pdmH1N1、H3N2 特异性设计
阳性对照 (Positive Control) 50 μL x 1管 (黄盖) 含四种病毒靶基因的混合质粒
阴性对照 (Negative Control) 1 mL x 1管 (亮黄色/蓝盖) 无菌超纯水
说明书 1 份 操作指南和参数说明
4. 操作流程简述
样本处理: 采集拭子样本,使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒提取病毒 RNA。
试剂配制(冰上操作): 按照说明书比例(如 N+2 法,N 为样本数)混合反应液、酶和引物探针,分装到 PCR 管中。
加样: 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 RNA(样本、阴性对照、阳性对照)。
上机扩增: 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序:
逆转录: 50℃,15-30 分钟。
预变性: 95℃,5-10 分钟。
PCR 循环: 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec(收集荧光),40-45 个循环。
结果判读标准:
阳性(+):
对应通道的扩增曲线呈典型的 S 型指数增长。
Ct 值 ≤ 35(或说明书设定的阈值)。
结论:样本中检出对应的流感病毒亚型。
阴性(-):
该通道无 Ct 值,或 Ct 值 > 35。
结论:样本中未检出该流感病毒亚型。
实验有效性:
阳性对照: 所有四个通道均需有明显扩增(Ct 值在预期范围内)。
阴性对照: 所有通道均无扩增曲线。
6. 注意事项与局限性
防污染(重中之重): PCR 检测极其灵敏,极易受气溶胶污染。严禁在检测区打开扩增后的 PCR 管盖。实验需严格分区(试剂准备区、样本制备区、扩增区)进行。
试剂保存: 试剂盒通常需在 -20℃ 条件下避光保存。运输和使用过程中应尽量避免反复冻融,以免影响酶活性。
样本采集: 样本采集部位(如鼻咽深部)的准确性直接影响检测结果。样本若不能立即检测,应置于 -70℃ 保存。
临床诊断: 本试剂盒仅用于临床辅助诊断,不作为确诊唯一依据。检测结果需结合患者的临床症状、流行病学史及其他检测结果综合判断。
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