NADPH-细胞色素C还原酶( NCR)试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。
测定原理:
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素c生成还原型细胞色素c,还原型细胞色素c在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 ml试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 ml试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。
4、最终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 ml,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。
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