屎肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

屎肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专为快速、高灵敏度检测屎肠球菌（Enterococcus faecium）设计，适用于科研用途。试剂盒包含优化的引物、预混反应体系及阳性对照，可实现对目标DNA的定性与定量分析，特异性强，无交叉反应。

规格与成分

反应体系：50次检测（20μL或40μL体系可选）

主要成分：

PCR预混液（含荧光染料）

屎肠球菌特异性引物混合液

阳性对照（1×10^8拷贝/μL，无传染性DNA片段）

超纯水（模板稀释用）

操作步骤

样本准备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配置（以20μL为例）：

预混液10 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 2 μL + 超纯水补至20 μL。

PCR程序设置（以ABI7500为例）：

预变性：95℃ 2分钟（不收集荧光信号）。

扩增循环（45次）：

95℃ 15秒（变性）

60℃ 30秒（退火/延伸，收集FAM通道信号）

标准曲线制备（定量分析）：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7拷贝/μL），每个浓度重复3孔。

结果分析

阈值设定：调整Baseline的Start值（3–15）和End值（5–20），确保阈值线位于指数扩增期。

判读标准：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：无扩增曲线或Ct值＞35。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免交叉污染。

试剂盒仅限科研使用，不适用于临床诊断。

不同仪器需根据说明书调整荧光通道（如FAM通道检测，禁用ROX参比荧光）。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输：冰袋低温运输。

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