粪肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

粪肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品用途

用于检测样品中粪肠球菌的特异性核酸序列，适用于科研、临床或环境样本的定性及定量分析。

试剂盒组成

PCR反应预混液（含引物、探针、dNTPs、酶等）

阳性对照（无传染性DNA片段，浓度1×10^8拷贝/μL）

荧光PCR专用模板稀释液

阴性对照（无核酸酶水）

保存条件

-20℃以下避光保存，有效期12个月。

操作步骤

1. 反应体系配置

推荐反应体积：20μL或25μL（根据仪器要求调整）。

加入待测模板DNA后，短暂离心混匀。

2. 荧光定量PCR仪设置

荧光通道：检测通道选择FAM，淬灭通道选择None（ABI系列仪器无需ROX参比荧光）。

循环参数：

预变性：95℃ 2分钟（1个循环，不收集荧光信号）；

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（收集荧光信号），共45个循环。

3. 标准曲线制备（定量检测适用）

使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），每个稀释度单独操作以避免污染。

标记离心管并加入稀释液，依次稀释至目标浓度。

结果分析

阈值设定：

调整Baseline的Start值（建议3~15）和End值（建议5~20），使阈值线位于扩增曲线指数期。

阴性质控品扩增曲线应平直或低于阈值线。

判定标准：

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型。

阴性：无Ct值或Ct值>35。

注意事项

操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

试剂解冻后需完全混匀，避免反复冻融。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

性能参数

灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的粪肠球菌核酸。

特异性：引物针对保守序列设计，与相近菌种无交叉反应。

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