产品介绍:
该试剂盒主要用于贝类(如牡蛎、贻贝等)养殖和检疫领域,针对折光马尔太虫(Marteilia refringens)进行高灵敏度、高特异性的检测。
折光马尔太虫是严重危害双壳贝类的寄生虫,可导致贝类大量死亡。该试剂盒基于实时荧光定量PCR(qPCR)技术,通过检测病原体的特异性基因序列实现精准诊断。
产品名称 | 折光马尔太虫核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 货号 | AP3576 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 48T |
�� 产品核心信息
检测对象:折光马尔太虫(Marteilia refringens)DNA。
检测原理:TaqMan荧光探针法(qPCR)。针对折光马尔太虫的基因组保守序列(如18S rRNA或ITS区域)设计特异性引物和探针。
荧光通道:通常为 FAM 通道(具体视试剂盒品牌而定)。
适用仪器:ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96、罗氏480等实时荧光定量PCR仪。
检测样本:贝类(牡蛎、贻贝等)的消化腺、鳃组织匀浆液或环境水体样本。
�� 试剂盒组成(以50次为例)
组分名称 规格 作用说明
2×qPCR Magic Mix 500 μL x 1管 含dNTPs、热启动Taq酶、Mg²⁺、缓冲液及UNG酶(防污染)
Primers & Probe Mix 100 μL x 1管 含折光马尔太虫特异性引物和FAM标记的探针
阳性对照 (PC) 50 μL x 1管 含折光马尔太虫目标基因片段的质粒DNA(通常浓度为1×10⁸ copies/μL)
阴性对照 (NC) 250 μL x 1管 无DNA酶水(ddH₂O)
�� 操作流程详解
1. 样本处理与DNA提取
组织样本:取贝类消化腺或鳃组织约20 mg,加入180 μL生理盐水或裂解液,匀浆。
DNA提取:
取200 μL匀浆液,使用基因组DNA提取试剂盒(如离心柱法或磁珠法)进行提取。
洗脱步骤:加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱DNA。
关键点:提取的DNA应避免反复冻融,建议分装保存于-20℃。
2. 反应体系配制(冰上操作)
总体系:20 μL(具体体积视说明书而定)。
配制表:
试剂 体积
2×qPCR Magic Mix 10 μL
Primers & Probe Mix 1 μL
模板DNA 2-5 μL
ddH₂O 补足至20 μL
�� 结果判读标准
1. 质控标准
阴性对照 (NC):FAM通道无扩增曲线(Ct值未定义或≥40)。
阳性对照 (PC):FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线,且Ct值 ≤ 30。
2. 样本判定
阳性 (+):FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线,且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有折光马尔太虫。
可疑 (±):Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检,若复测Ct值 < 35则判为阳性。
阴性 (-):FAM通道无扩增曲线,或Ct值 ≥ 40。
⚠️ 注意事项
防污染:必须严格实行分区操作(试剂准备区、样本制备区、扩增区),避免气溶胶污染。阳性对照应单独存放和使用。
探针保护:荧光探针对光敏感,使用和保存过程中应避光。
临床意义:检测结果需结合贝类的临床症状(如消瘦、闭壳无力、消化腺颜色异常等)及流行病学背景进行综合判断。
生物安全:阳性对照含有病原基因片段,操作时应视为具有潜在生物危害性,废弃物需高压灭菌处理。
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注意事项
防污染操作
需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作,使用带滤芯吸头及专用实验服。
阳性对照管理
浓度高达1×10⁸拷贝/μL,需单独存放并避免污染其他试剂。
局限性
仅限科研使用,不可用于临床诊断;
环境样本中可能存在PCR抑制剂,需设置内参对照。
关键字: 折光马尔太虫;PCR-荧光探针法;核酸检测试剂盒;
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