诺如病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 诺如病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Norovirus Universal Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4258 |
产品概述
本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR技术，针对诺如病毒GI和GII型基因组高度保守区域设计特异性引物及探针（FAM/Cy5双通道标记），适用于粪便、呕吐物等临床样本中诺如病毒核酸的定性及定量检测。检测灵敏度达100拷贝/反应，特异性强，无交叉反应。
检测原理
通过逆转录酶将病毒RNA转化为cDNA，随后采用荧光探针法对目标基因进行扩增，实时监测荧光信号，实现病毒载量分析及分型（GI/GII）。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500/7900系列
Roche LightCycler
Bio-Rad iCycler
Qiagen Rotor-Gene
试剂盒组成
探针法qRT-PCR缓冲液（0.5 mL×1管）
酶混合液（含逆转录酶及Taq DNA聚合酶，1 mL×1管）
阳性对照（250 μL×1管，含诺如病毒GI/GII型靶序列）
阴性对照（250 μL×1管，无RNA酶水）
荧光PCR专用模板稀释液（1 mL×1管）
自备试剂
样本RNA提取试剂（推荐磁珠法或离心柱法）
无RNA酶超纯水
储存与运输
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期2年；低温运输。
操作步骤
RNA提取
使用病毒RNA提取试剂盒处理样本，建议提取后立即检测或-80℃保存。
反应体系配制
每反应需加入：10 μL缓冲液、0.5 μL酶混合液、5 μL模板RNA，补超纯水至20 μL。
阴性/阳性对照需单独设孔。
PCR程序设置
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 3分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）
结果判读
阳性：FAM（GI型）或Cy5（GII型）通道Ct值≤35，且扩增曲线呈S型。
阴性：无Ct值或Ct值＞38。
注意事项
本试剂仅限科研使用，不可用于临床诊断。
不同批号组分禁止混用。
操作时需分区进行（样本处理、试剂配制、扩增分析），避免污染。
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