产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于赭曲霉（Aspergillus ochraceus）核酸的定性与定量检测。通过优化引物设计及反应体系，确保高灵敏度（检测限低至100拷贝/反应）和高特异性，避免与其他病原体DNA交叉反应。适用于科研用途，兼容主流荧光定量PCR仪。
产品名称 | 赭曲霉染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Aspergillus ochraceus Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4200 |
检验原理
采用SYBR Green等荧光染料实时监测PCR扩增过程。当反应体系中存在赭曲霉特异性靶序列时，引物与模板结合并扩增，释放荧光信号。通过仪器动态监测荧光强度，实现靶标核酸的定性与定量分析。
试剂盒组成
赭曲霉扩增预混液：25 μL ×1管（含dNTPs、酶、缓冲液等）
荧光染料反应液：975 μL ×1管
阳性质控品：50 μL（1×10^8拷贝/μL，用于标准曲线制备）
阴性质控品：50 μL（DEPC-H2O，用于污染监测）
说明书：1份
注意事项：
不同批号组分不可混用。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
操作步骤
1. DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管，编号7至2，每管加45 μL DEPC-H2O。
7号管加5 μL阳性质控品（1×10^8拷贝/μL），涡旋混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品。
依次梯度稀释至1×10^2拷贝/μL（6号至2号管），每步更换枪头。
3. PCR反应体系（20 μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 荧光染料反应液 | 10 |
| 扩增预混液 | 2 |
| 模板DNA/标准品 | 5 |
| DEPC-H2O | 3 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃/3 min | 1 |
| 变性 | 95℃/15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃/30 sec | |
5. 数据分析
定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。
定量：以标准曲线计算拷贝数。
适用仪器
ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等荧光定量PCR仪。
性能参数
线性范围：1×10^2~1×10^7拷贝/反应（R²≥0.99）。
特异性：不与黑曲霉、黄曲霉等常见真菌交叉反应。
注意事项
实验分区操作（样本制备区、扩增区），避免污染。
阴性质控品应无扩增信号，否则需排查污染。
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