寄生曲霉染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对寄生曲霉基因组高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性或定量检测，定量线性范围覆盖至少5个数量级（分析灵敏度可达100拷贝/反应）。

试剂组成

| 组分名称 | 规格/数量 |

| 寄生曲霉预混扩增液 | 25μL ×1管 |

| 寄生曲霉反应液 | 975μL ×1管 |

| 阳性质控品 | 50μL ×1管（1×10^8拷贝/μL） |

| 阴性质控品 | 50μL ×1管 |

| 说明书 | 1份 |

注意事项：

不同批号试剂不可混用。

避免反复冻融，开封后需分装保存。

操作步骤

1. DNA提取（样本制备区）

使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，OD260/280为1.7-2.0。

2. 标准曲线制备（独立区域操作）

标记6管为7至2号，每管加45μL DEPC-H₂O。

7号管加5μL阳性质控品（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀得1×10^7拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），每步更换枪头。

3. PCR反应体系（反应区）

| 组分 | 体积（20μL体系） |

| 预混扩增液 | 1μL |

| 反应液 | 19μL |

| 模板DNA | 2μL（≤500 ng） |

循环条件：

预变性：95℃ 5分钟；

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）；

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃升温。

性能参数

特异性：引物经优化，不与常见病原体交叉反应。

灵敏度：最低检测限100拷贝/反应。

适用仪器：ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阴/阳性质控品需同步检测。

熔解曲线需呈现单一峰值，否则提示非特异性扩增。

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