小鼠细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，专为科研用途设计，用于检测小鼠细小病毒(MPV)或小鼠微小病毒(MVM)。试剂盒采用实时荧光定量PCR技术，具有高灵敏度和高特异性。

产品特点

即开即用：用户只需提供样品DNA/RNA模板

高灵敏度：引物和探针经过优化设计，检测限低

质量控制：提供阳性对照(1×10⁸拷贝/μL)，便于区分假阴性样品

高特异性：引物针对病毒高度保守区设计，不与其它微生物发生交叉反应

多功能性：既可用于定性检测，也可用于定量检测，定量线性范围达5个数量级

规格：50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应

技术原理

本试剂盒采用TaqMan探针法原理：

探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号

通过实时监测荧光信号增长，实现对起始模板的定量分析

试剂盒组成

探针法qPCR缓冲液(500μL)

探针法qPCR酶混合液(100μL)

荧光PCR专用模板稀释液(1mL)

病毒特异性引物混合液(100μL)

病毒特异性探针(50μL)

阳性对照(1×10⁸拷贝/μL，50μL)

产品说明书(1份)

储存条件

-20℃避光保存，避免反复冻融(少于7次)，有效期12个月

使用方法

标准曲线样品制备

标记6个离心管为7、6、5、4、3、2号

各管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(使用带芯枪头)

7号管加入5μL阳性对照(1×10⁸拷贝/μL)，震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL标准品

依次进行10倍系列稀释至2号管，获得6个浓度梯度的标准曲线样品

样品DNA/RNA制备

使用自选方法提取纯化样品核酸，本试剂盒与多数市售提取试剂盒兼容

建议设置N+2个提取(N为待测样品数)，包括1个阳性对照和1个阴性对照

qPCR反应设置(20μL体系)

| 成分 | 样品管(N+2) | 阴性对照 | 标准曲线管(6管) |

| qPCR缓冲液 | 各10μL | 10μL | 各10μL |

| qPCR酶混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |

| 特异性探针 | 各1μL | 1μL | 各1μL |

| 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |

| 样品核酸 | 各5μL | - | - |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

| 标准品 | - | - | 各5μL |

PCR反应程序

逆转录(仅RNA检测需要)：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

PCR循环(40个循环)：

94℃ 15秒

60℃ 1分钟(采集FAM通道荧光信号)

数据分析

定量检测

以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线

根据样品Ct值推算其核酸浓度

定性检测

阴性对照：Ct≥40

阳性对照：Ct≤30且有典型扩增曲线

待测样品：

Ct≤35：阳性

Ct≥40：阴性

35<Ct<40：需重复检测

注意事项

实验分区操作：样品制备区、试剂配制区、扩增区严格分离

使用带滤芯枪头，避免交叉污染

试剂使用前充分融化混匀，短暂离心

反应液避光保存，避免气泡产生

穿戴个人防护装备，使用一次性耗材

实验后对工作台和仪器进行消毒处理

产品声明

本产品仅限科研使用，不得用于临床诊断或其他非科研用途。

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