小鹅瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 小鹅瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Goose Plague Virus Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4662 |
检测原理
基于荧光定量PCR技术，针对小鹅瘟病毒保守序列设计特异性引物及探针，通过实时荧光信号检测病毒DNA浓度，灵敏度达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级。
试剂盒组成
阳性对照：86 bp无传染性DNA片段（1×10^8拷贝/μL）。
模板稀释液：用于标准曲线制备。
PCR反应液：含预混引物、探针、dNTPs、Taq酶等（即开即用）。
可选附件：部分品牌提供15次病毒DNA裂解液试用装。
操作步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度）
标记离心管（7至2号），依次稀释阳性对照至10^7~10^2拷贝/μL，每步换枪头避免污染。
2. 样本DNA提取
兼容多数商业病毒DNA提取试剂，建议设置阴性/阳性对照（N+2样本）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×PCR Mix | 10 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| ROX（部分仪器）| 0.4 |
| ddH₂O | 补至20 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 1 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 30 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 15 sec | |
5. 数据分析
通过标准曲线（Ct值-log浓度）计算样本病毒载量，Tm值需与阳性对照一致以排除假阳性。
注意事项
操作分区：稀释阳性对照需在独立区域，避免气溶胶污染。
仪器兼容性：ABI系列需ROX校正，其他机型（如Bio-Rad、LightCycler）无需。
质量控制：若阴性对照出现扩增，表明污染，需重新实验。
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