产品基本信息
规格：50次/盒（20μL反应体系）
保存条件：-20℃避光保存，保质期12个月。
运输条件：低温运输（-20℃冰袋或干冰）。
用途：科研用途，不可用于临床诊断。
产品名称 | 兔巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pasteurella multocida (Rabbit) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4871 |
检测原理
基于TaqMan探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ）。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。
定量分析：通过实时监测荧光强度（Ct值），结合标准曲线对靶标核酸进行定量或定性分析。
产品特点
高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10拷贝/μL。
高特异性：针对兔巴氏杆菌保守序列设计，无交叉反应。
即开即用：预混缓冲液与酶体系，仅需提供样品RNA/DNA模板。
内控设计：含阳性对照（无传染性DNA片段，10^7~10^8拷贝/μL）和阴性对照。
兼容性：适配常见荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 50~100μL |
| 荧光模板稀释液 | 1mL |
| 引物-探针混合液 | 100μL |
| 阳性对照（DNA片段） | 50μL（10^8拷贝/μL） |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样品核酸提取
推荐使用柱式病毒RNA/DNA提取试剂盒，设置阴性/阳性提取对照。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板（样品/标准品） | 5 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 10~30 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 95℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35（或39），扩增曲线呈S型。
阴性：Ct ≥ 40，或无扩增曲线。
灰区（35~40）：需重复检测。
注意事项
分区操作：核酸提取、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每次实验必须包含阴性对照（无模板）和阳性对照。
样本要求：RNA/DNA应避免反复冻融，提取后建议立即检测或-70℃保存。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率或操作误差可能影响定量准确性。
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关键字： 兔巴氏杆菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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