产品基本信息

规格:50次/盒(20μL反应体系)
保存条件:-20℃避光保存,保质期12个月。
运输条件:低温运输(-20℃冰袋或干冰)。
用途:科研用途,不可用于临床诊断。
产品名称 | 兔巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pasteurella multocida (Rabbit) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4871 |

检测原理

基于TaqMan探针法:
探针设计:5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团(如NFQ)。
信号释放:PCR扩增时,Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针,使报告基团与淬灭基团分离,释放荧光信号。
定量分析:通过实时监测荧光强度(Ct值),结合标准曲线对靶标核酸进行定量或定性分析。
产品特点

高灵敏度:优化引物与探针,检测限低至10拷贝/μL。
高特异性:针对兔巴氏杆菌保守序列设计,无交叉反应。
即开即用:预混缓冲液与酶体系,仅需提供样品RNA/DNA模板。
内控设计:含阳性对照(无传染性DNA片段,10^7~10^8拷贝/μL)和阴性对照。
兼容性:适配常见荧光定量PCR仪(如ABI 7500、Bio-Rad CFX等)。
试剂盒组成

| 成分 | 规格 |
| qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 50~100μL |
| 荧光模板稀释液 | 1mL |
| 引物-探针混合液 | 100μL |
| 阳性对照(DNA片段) | 50μL(10^8拷贝/μL) |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤

1. 标准曲线制备(6个梯度稀释)
使用阳性对照按10倍梯度稀释(10^2~10^7拷贝/μL),独立操作避免污染。
2. 样品核酸提取
推荐使用柱式病毒RNA/DNA提取试剂盒,设置阴性/阳性提取对照。
3. qPCR反应体系(20μL)
| 成分 | 体积(μL) |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板(样品/标准品) | 5 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 10~30 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| 扩增(40循环) | 95℃ 15 sec → 60℃ 1 min(采集FAM信号) |
数据分析
定量检测:以标准曲线log值为横轴,Ct值为纵轴,计算样品浓度。
定性检测:
阳性:Ct ≤ 35(或39),扩增曲线呈S型。
阴性:Ct ≥ 40,或无扩增曲线。
灰区(35~40):需重复检测。
注意事项

分区操作:核酸提取、试剂配制、扩增需在不同区域进行,避免交叉污染。
质量控制:每次实验必须包含阴性对照(无模板)和阳性对照。
样本要求:RNA/DNA应避免反复冻融,提取后建议立即检测或-70℃保存。
局限性:
基因突变可能导致假阴性;
提取效率或操作误差可能影响定量准确性。
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关键字: 兔巴氏杆菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;