牛巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pasteurella multocida (Bovine) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4812 |
预期用途
用于牛巴氏杆菌（Pasteurella spp.）核酸的定性检测，适用于科研实验，不可用于临床诊断。
检验原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对牛巴氏杆菌高度保守基因区域设计特异性引物及荧光标记探针。在扩增过程中，探针与目标序列结合后被核酸酶切割，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现核酸的定性检测。
试剂盒组成
核心成分包括：
PCR反应液：含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等（875μL–975μL/管）。
酶混合液：热启动DNA聚合酶（125μL–1mL/管）。
阳性对照：牛巴氏杆菌靶序列（40μL–50μL/管，1×10⁸拷贝/μL）。
阴性对照：无核酸酶水（40μL–50μL/管）。
说明书：1份。
储存条件与有效期
储存：避光保存于-20℃以下，避免反复冻融（建议冻融≤7次）。
有效期：12个月。
操作步骤
样本处理
采集牛全血、组织、分泌物等，使用商品化DNA提取试剂盒提取核酸。
提取后核酸建议-15℃以下保存，避免降解。
试剂配制
按反应数（N=样本数+阴/阳性对照）配制混合液（如19.5μL反应液+0.5μL扩增液/反应）。
分装至PCR管，加入5μL模板DNA。
PCR扩增
推荐程序：预变性95℃ 5min → 40循环（95℃ 15s → 60℃ 60s，荧光采集）。
结果分析
阈值设定：以阴性对照荧光信号为基线。
阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
质控要求：每批实验需包含阴/阳性对照，阴性对照无Ct值，阳性对照Ct值在预期范围内。
废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%酒精消毒台面，耗材按生物危害废物处理。
性能参数
灵敏度：≥1000拷贝/反应。
特异性：不与常见其他病原体（如大肠杆菌、沙门氏菌）发生交叉反应。
适用仪器：ABI系列、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。
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