齿瓣石斛探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

齿瓣石斛探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专为齿瓣石斛（Dendrobium devonianum）的核酸定性及定量检测设计，采用探针法荧光定量PCR技术，具有高灵敏度和特异性，适用于科研用途。

试剂盒组成

探针法qPCR缓冲液

探针法qPCR酶混合液

qRT-PCR探针

探针qRT-PCR引物混合液

阳性对照（DNA片段，非活体样本）

荧光PCR专用模板稀释液

阴性对照（超纯水）

规格：50次/盒（20μL体系/次）

储存条件与有效期

储存温度：-20℃±5℃，避光保存。

有效期：12个月（自生产日期起）。

实验操作流程

1. 样品准备

样本类型：组织、细胞、血液、粪便或病灶部位样本。

RNA提取：建议使用兼容的RNA提取试剂盒，或直接使用裂解液作为PCR模板。

2. 阳性对照稀释（标准曲线制备）

按10倍梯度稀释阳性对照（10E2~10E7拷贝/μL），每个稀释度需独立操作以避免污染。

3. 反应体系配制（20μL/管）

| 成分 | 样品管/N+2管 | 阴性对照管 | 标准曲线管（2-7号） |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| qPCR酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| qRT-PCR探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样品RNA模板 | 5 μL | — | — |

| 超纯水 | — | 5 μL | — |

| 标准曲线稀释液 | — | — | 5 μL（对应管号） |

4. PCR反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环）| 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM通道信号） |

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样品浓度。

定性检测：

阴性对照：Ct≥40。

阳性对照：Ct≤39且扩增曲线典型。

样品判定：Ct≤39为阳性；Ct≥40为阴性；39<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免交叉污染。

防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

质量控制：阳性对照需最后加入，反应液避光保存，避免气泡。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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