铁皮石斛探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 铁皮石斛探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Dendrobium officinale Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4684 |
产品基本信息
规格：50次/盒（20μL体系）
用途：科研专用，适用于铁皮石斛的定性及定量检测。
储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。
产品特点
即开即用：仅需提供样品DNA模板，预混优化引物与探针。
高灵敏度与特异性：引物探针针对铁皮石斛保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。
双重检测功能：支持定性（阴阳性判定）和定量检测（线性范围≥5个数量级）。
内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于排除假阴性。
兼容性：适配多数市售核酸纯化试剂盒。
试剂盒组成
荧光定量PCR预混液（含探针、dNTPs、酶等）
阳性对照DNA（1×10⁸拷贝/μL）
荧光PCR专用模板稀释液
说明书（详细组分以实际说明书为准）
操作步骤
标准曲线制备（定量分析）
标记6管（7-2号），每管加45 μL稀释液。
梯度稀释阳性对照：7号管加5 μL原液（终浓度1×10⁷拷贝/μL），依次稀释至2号管（1×10²拷贝/μL），冰上保存。
样品DNA制备
自选方法提取DNA，建议设置N+2个样本（含阴阳性对照）。
qPCR反应设置（20μL体系）
定量分析：标记N+9管（N+2样本+1阴性对照+6标准曲线）。
程序设置：按仪器要求优化（通常95℃预变性，40-45循环扩增）。
数据分析
定量：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品浓度。
定性：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样品Ct≤35判为阳性，35<Ct<40需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、加样需独立区域，避免污染。
防降解：试剂避光保存，使用前充分混匀并离心。
质控要求：实验全程使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。
技术参数
检测限：≤10²拷贝/μL（依仪器性能可能调整）。
扩增效率：≥90%（标准曲线R²≥0.99）。
专利引物（参考CN108728573A）：
铁皮石斛特异引物：TPF 5’-TATTGTGATAAGCGCGCCCG-3’，TPR 5’-AGGCCTATGCTATTGTGATAAGCG-3’。
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