技术原理

基于实时荧光定量PCR(qPCR)探针法:
探针设计:5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团(如NFQ),探针与靶序列结合后,Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针,释放荧光信号。
定量分析:通过监测荧光强度增长(Ct值)实现靶序列的定性和定量检测。
产品名称 | 鱼腥草探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Houttuyniae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4918 |

产品特点

高灵敏度:可检测低至几百拷贝的靶序列。
高特异性:引物探针针对鱼腥草保守序列设计,避免交叉反应。
即开即用:预混缓冲液、酶、引物及探针,用户仅需提供样品RNA/DNA模板。
内控对照:含阳性对照(无传染性DNA片段),区分假阴性结果。
试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qPCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |
| 引物-探针混合液 | 100μL | 特异性扩增鱼腥草靶序列 |
| 阳性对照(10^7-10^8拷贝/μL) | 50μL | 标准曲线建立及质控 |
操作步骤

1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释(10^1-10^7拷贝/μL),独立操作避免污染。
2. 样品处理
RNA/DNA提取:推荐使用柱式提取试剂盒,避免降解。
质控设置:每批次需包含阴性对照(水)和阳性对照。
3. qPCR反应体系(20μL)
| 组分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物-探针混合液 | 2μL |
| 模板(样品/标准品) | 5μL |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 10-30 min | 1 |
| 预变性 | 94-95℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 60 sec | 40 |
5. 数据分析
定量:以标准曲线log值为横轴,Ct值为纵轴,计算样品浓度。
定性:阴性对照Ct≥40;阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。
注意事项

分区操作:试剂配制、样品处理、扩增需在独立区域进行,避免交叉污染。
防降解:RNA操作需在冰上完成,避免反复冻融。
质控要求:实验需包含阴/阳性对照,异常结果需重复验证。
废弃物处理:实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及耗材。
局限性
检测结果受样本质量、提取效率及操作规范影响。
病原体突变可能导致假阴性;污染可能导致假阳性。
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关键字: 鱼腥草;探针法;PCR鉴定试剂盒;
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