检测原理
本试剂盒基于探针法实时荧光定量PCR技术，通过特异性探针（5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团）与靶序列结合。在扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。通过监测荧光强度变化，实现对鸭跖草RNA的定量及定性分析。
产品名称 | 鸭跖草探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Commelinae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4927 |
产品特点
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。
高特异性：引物及探针针对鸭跖草高度保守区设计，无交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针混合物，仅需提供样品RNA模板。
内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），可区分假阴性结果。
兼容性：适配常见RNA提取试剂盒（需自备）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 用于标准曲线稀释 |
| 鸭跖草引物混合液 | 100μL | 特异性扩增引物 |
| 鸭跖草qRT-PCR探针 | 50μL | 荧光标记探针 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 反应体系质控 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。
2. RNA提取
使用自选方法提取样品RNA，建议设置阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 样品RNA | 5μL | - | - |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
| 标准品稀释液 | - | - | 5μL |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号） | 40 |
结果判读
定量分析：以标准曲线Ct值计算样品拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。
可疑：35<Ct<40，需复测确认。
阴性：Ct≥40或无扩增曲线。
注意事项
操作全程需在无核酸污染环境下进行，建议使用带滤芯枪头。
试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。
阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。
本产品仅限科研用途。
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