巴斯德毕赤酵母细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)
商品属性
产品名称 | 巴斯德毕赤酵母细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参) | 英文名称 | Pichia pastoris Cell Genomic DNA Residue Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit (Without Internal Control) |
规格 | 50T | 货号 | PR4801 |
预期用途
本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，专用于检测生物制品或科研样本中巴斯德毕赤酵母细胞基因组DNA残留量，适用于生产质量控制或科研分析。检测结果需结合其他指标综合判断，不可用于临床诊断。
检验原理
通过针对巴斯德毕赤酵母基因组DNA保守区域设计的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号，实时监测扩增曲线，实现定性或定量分析。灵敏度可达0.01 pg/μL，线性范围覆盖5个数量级。
试剂组成
2×Probe qPCR MasterMix（0.5 mL）
荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）
超纯水（1 mL）
qPCR引物-探针干粉（50次反应，需用165 μL超纯水复溶）
阳性对照（1000 pg/μL，50 μL）
阴性对照（50 μL）
说明书（1份）
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。
适用仪器
兼容ABI、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。
自备耗材与设备
无核酸酶离心管（0.2 mL PCR管、1.5 mL离心管）
滤芯吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）
离心机、振荡器、移液器
样品要求
样本类型：细胞培养物、发酵液或纯化后的生物制品。
保存条件：短期-20℃，长期-70℃（避免反复冻融）。
运输：2~8℃冰袋运输。
操作步骤
1. DNA提取
使用商品化核酸提取试剂盒（推荐配套病毒基因组DNA提取试剂盒），提取后模板保存于-15℃以下。
2. 标准曲线制备（定量分析需选）
将阳性对照（1000 pg/μL）按10倍梯度稀释至0.01 pg/μL，共6个浓度点。
稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。
3. 反应体系配制（20 μL/反应）
| 成分 | 体积（μL） |
| 2×Probe MasterMix | 10 |
| 引物-探针混合液 | 3 |
| 模板DNA/对照 | 7 |
4. PCR扩增程序
预变性：95℃ 10分钟
循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）
结果判读
定量分析：以标准曲线计算样品DNA浓度（log值）。
定性分析：
阳性：Ct值<35，呈S型扩增曲线。
阴性：Ct值≥38或无信号。
可疑（35≤Ct<38）：需复检确认。
注意事项
分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离），避免污染。
试剂使用前需完全溶解并离心混匀。
阳性对照单独存放，避免污染其他组分。
实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁工作台。
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