产品概述
本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，专用于鸦胆子核酸的定性及定量检测。通过针对鸦胆子高度保守基因区域设计的特异性引物和探针，结合荧光信号实时监测，实现高灵敏性、高特异性的检测。
适用范围
科研用途（严禁用于临床诊断或治疗）。
适用于鸦胆子感染的辅助诊断研究。
产品名称 | 鸦胆子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Bruceae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4928 |
检验原理
探针法原理：
探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。
PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，信号强度与靶序列含量成正比。
实时荧光定量PCR：通过循环阈值（Ct值）与标准曲线对比，计算起始模板浓度。
试剂组成
| 成分 | 规格/用量 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 引物混合液 | 100 μL |
| TaqMan探针 | 50 μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |
| 说明书 | 1份 |
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
操作步骤
1. 标准曲线制备
使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免交叉污染。
2. 样本处理
RNA提取：推荐使用商业化病毒RNA提取试剂盒，提取后模板保存于-20℃。
阴性/阳性对照设置：每批次实验需包含阴性对照（超纯水）和阳性对照（试剂盒提供）。
3. PCR反应体系（20 μL）
| 成分 | 用量（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 否 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 否 |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | 是（FAM通道） |
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增。
灰区（35<Ct<40）：需复检，复检Ct<40判为阳性。
注意事项
操作需分区（样本处理区、试剂配制区、扩增区）以避免污染。
反复冻融不超过7次，避免试剂失效。
仅限科研使用，临床诊断需经国家相关部门批准。
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