转基因水稻品系LLRICE62核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对转基因水稻LLRICE62品系特有的外源基因插入位点序列设计特异性引物和TaqMan探针。LLRICE62品系含有bar基因（赋予草铵膦抗性）和PAT蛋白。试剂盒通常靶向检测bar基因或其与水稻基因组的连接区域（边界序列）。在PCR扩增过程中，随着目标DNA的指数级扩增，探针被特异性切断，荧光信号随之释放并被仪器实时捕捉。

高特异性：能够精准识别LLRICE62品系，与非转基因水稻及其他转基因水稻品系（如Bt63、KMD1等）无交叉反应。

主要优势：

高特异性：引物和探针针对LLRICE62特有序列设计，特异性≥99%。

高灵敏度：检出限可达1×10³ 拷贝/毫升或0.1%（相对于内源基因），能够检测出极低含量的LLRICE62成分。

抗干扰性强：可检测深加工样本（如经过高温处理、水解蛋白等），稳定性好。

快速检测：整个检测流程（含DNA提取）通常在1.5-2小时内完成。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

反应体系  20 μL (包含预混液、引物探针、模板DNA)

适用仪器  ABI 7500、Bio-Rad CFX96等主流荧光PCR仪

适用样本  水稻种子、米粉、米糠、饲料及各类水稻加工制品

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

qPCR预混液：包含反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等。

引物探针混合液：针对LLRICE62特异序列设计的引物和探针。

阳性对照：含有LLRICE62基因片段的质粒或标准DNA。

阴性对照：无模板对照（NTC）。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，有效期通常为 12个月。运输过程需使用干冰或冰袋，避免反复冻融。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的水稻植株、种子或加工食品样本。

使用CTAB法或商品化的DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制20 μL的反应体系。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM）、反应程序并运行。

结果判读

阳性：FAM通道Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈典型的“S”型增长。

阴性：Ct值 > 40 或无Ct值，曲线为直线。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。反应结束后严禁开盖，应直接丢弃入密封袋中处理。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

公司正在出售的产品：

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。