产品介绍:
H7N9亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测H7N9禽流感病毒核酸的分子诊断工具。该试剂盒主要采用实时荧光RT-PCR技术,通过特异性扩增病毒的特定基因片段,帮助医疗机构快速判断样本中是否存在H7N9病毒。
产品名称 | H7N9 亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒 |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3031 |
检测原理
该试剂盒的核心原理是实时荧光RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)技术,通常基于TaqMan探针法。
逆转录(RT):由于H7N9是RNA病毒,首先需要利用逆转录酶将提取的病毒RNA转化为互补DNA(cDNA)。
双重/多重检测策略:
甲型流感通用检测:首先确认样本是否为甲型流感病毒(FluA),通常针对保守的M基因。
亚型分型检测:针对H7N9的HA基因(H7亚型)和NA基因(N9亚型)设计特异性引物和探针。只有当M基因、H7基因和N9基因均呈阳性时,才能确诊为H7N9亚型禽流感病毒。
荧光信号:在PCR扩增过程中,随着目标DNA片段的指数级扩增,标记在探针上的荧光基团被释放,仪器实时监测荧光信号的变化,从而判断样本中病毒核酸的有无及含量。
核心组成
标准的试剂盒通常包含以下关键组分:
PCR反应液:包含反应缓冲液、dNTPs、特异性引物和TaqMan探针(分别标记不同荧光基团,如FAM、VIC等)。
酶混合液:包含逆转录酶和DNA聚合酶(Taq酶)。
阳性对照:含有H7N9目标基因片段的质粒或灭活病毒,用于验证试剂盒的有效性。
阴性对照:无核酸酶的水,用于监控是否存在污染。
内对照(部分试剂盒包含):用于监控样本采集质量和排除PCR抑制物的影响。
适用样本与操作流程
适用样本类型:
呼吸道样本:咽拭子、鼻拭子、痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液等。
标准操作流程:
样本采集:使用无菌拭子采集呼吸道分泌物,保存于病毒采样管中。
核酸提取:使用病毒RNA提取试剂盒(如磁珠法)提取样本中的总RNA。
体系配置:将提取的RNA、PCR反应液和酶液按比例混合配制反应体系。
上机扩增:将反应管放入荧光定量PCR仪中,运行预设程序(通常包括逆转录、预变性和扩增循环)。
结果分析:根据扩增曲线的形状、Ct值(循环阈值)及荧光通道判定结果。
✨ 产品特点
高特异性:能够特异性识别H7N9病毒,与其他流感病毒亚型(如H1N1、H3N2、H5N1)无交叉反应。
高灵敏度:最低检测限通常可达100-500拷贝/毫升,能够检测出极低浓度的病毒,适用于早期诊断。
快速高效:整个检测过程(从核酸提取到出结果)通常在2-3小时内完成,远快于传统的病毒分离培养法。
操作便捷:闭管检测,无需电泳,减少污染风险。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件:试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存,避免反复冻融(尤其是酶液)。
防止污染:必须严格分区操作(试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区),使用带滤芯的吸头,防止气溶胶污染导致假阳性。
样本质量:样本采集、运输和保存不当可能导致病毒RNA降解,造成假阴性结果。样本应尽快检测或低温保存。
结果解读:阴性结果不能完全排除感染,需结合患者的临床症状、流行病学史(如禽类接触史)和其他检测结果综合判断。
�� 临床与应用意义
早期诊断:在发病早期(通常前3天)进行确诊,有助于及时隔离和治疗,降低重症率。
疫情防控:作为H7N9监测网络的核心工具,用于追踪病毒传播链,防止疫情扩散。
公共卫生应急:在禽流感暴发期间,作为快速识别病例的关键手段,保障公共卫生安全。
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注意事项:
1、严防污染
分区操作:必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样,避免气溶胶交叉污染。
专用耗材:使用无核酸酶的枪头、EP管等,建议使用带滤芯枪头。
规范操作:加样后立即盖紧管盖,避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理:样本采集后应立即冷藏(2-8℃),长期保存需置于-70℃以下,避免反复冻融。
试剂保存:严格按照说明书要求的温度(通常是-20℃或2-8℃)保存试剂,避免反复冻融。
对照设置:每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照,监控实验有效性。
3、注意安全
生物安全:阳性样本需按生物安全三级标准处理,实验人员需佩戴个人防护装备(PPE)。
废弃物处理:所有废弃物(包括耗材、样本)需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃
关键字: H7N9 ;亚型禽流感病毒;检测试剂盒;
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