产品介绍:

克柔假丝酵母菌是一种重要的机会性致病真菌,属于假丝酵母菌属(念珠菌属)。它天然对氟康唑等部分唑类抗真菌药物耐药,因此准确、快速地将其从其他念珠菌(如白假丝酵母菌、热带念珠菌)中鉴别出来,对于指导临床用药(通常首选棘白菌素类或两性霉素B)具有至关重要的意义。
产品名称 | 克柔假丝酵母核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3273 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
1. 检测原理与技术

该试剂盒主要基于实时荧光定量PCR(qPCR)技术,通常采用TaqMan探针法。
核心机制:
DNA提取:从血培养瓶、全血、痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)或无菌体液等样本中提取真菌的基因组DNA。
特异性扩增:针对克柔假丝酵母菌基因组中高度保守且具有种特异性的区域设计引物和探针。
常见靶标:ITS区域(内转录间隔区)、26S rRNA基因或种特异性蛋白编码基因。
荧光检测:如果样本中存在克柔假丝酵母菌DNA,扩增过程中会释放特定的荧光信号(通常标记为FAM或VIC通道)。
内标质控:试剂盒通常包含内源性内标(如人源基因)或外源性内标,用于监控DNA提取和PCR扩增过程,防止假阴性结果。
2. 试剂盒特点与性能

这类试剂盒专为真菌快速鉴定设计,具有以下显著特点:
性能维度 描述
特异性 极高。引物和探针专门针对克柔假丝酵母菌设计,通常不会与白假丝酵母菌、热带念珠菌、光滑念珠菌等其他常见念珠菌发生交叉反应。
灵敏度 高。最低检测限通常可达 10²~10³ copies/mL,能有效检测出微量真菌感染。
临床价值 指导用药。由于克柔假丝酵母菌对氟康唑天然耐药,快速检出可避免使用无效药物,指导临床直接选用敏感药物。
检测速度 快速。整个检测流程(含核酸提取)通常在 2-3 小时 内完成,远快于传统培养法(需24-48小时)和药敏试验。
3. 适用样本与应用场景

适用样本:
血培养报阳瓶:用于直接鉴定血流感染的病原体。
无菌体液:如脑脊液、胸水、腹水等。
呼吸道样本:痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)。
组织样本:经处理后的组织匀浆。
应用场景:
血流感染诊断:快速鉴定真菌性败血症的病原体。
侵袭性真菌病(IFD)辅助诊断:用于高危人群(如ICU患者、造血干细胞移植受者、长期使用广谱抗生素者)的早期诊断。
抗真菌治疗方案制定:一旦检出克柔假丝酵母菌,临床医生可考虑避开氟康唑,调整为更有效的抗真菌药物。
4. 市场与研发动态

主要形式:
单重检测试剂盒:专门针对克柔假丝酵母菌。
多重/多重联检试剂盒:市面上也有“念珠菌属核酸检测试剂盒(多重PCR法)”,可以在一个反应体系中同时检测并区分白假丝酵母菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔假丝酵母菌和近平滑念珠菌等常见致病念珠菌。
5. 操作注意事项

样本处理:真菌细胞壁较厚,DNA提取时通常需要进行破壁步骤(如酶消化或机械破碎),否则可能导致假阴性。
防污染:PCR检测极其灵敏,必须严格分区操作,防止扩增产物污染导致假阳性。
结果解读:核酸检测结果需结合患者的临床表现、影像学检查及其他实验室检查结果(如G试验、GM试验)综合判断。阳性结果表明存在克柔假丝酵母菌感染或定植,需结合标本来源(无菌部位 vs. 开放部位)判断其临床意义。
公司正在出售的产品:

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人c-fos PCR检测试剂盒 | 液体样本蛋白提取试剂盒100T |
操作步骤:

整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑,核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本:鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解:将拭子浸入裂解液,充分混匀后室温静置10分钟。
提取:采用磁珠法或离心柱法提取总RNA,严格按照试剂盒说明书操作。
保存:洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备:在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积,通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系:例如,使用20μL体系的试剂盒,可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL(具体体积请以实际说明书为准)。
分装:将配好的反应体系分装至PCR反应管中(如20μL/管)。
加样:在样本处理区,分别向反应管中加入5μL的模板RNA(样本、阳性质控、阴性质控)。盖紧管盖,短暂离心,避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序:将反应管放入荧光定量PCR仪,运行预设程序。典型程序包括:
逆转录:50℃,15分钟(将RNA逆转录为cDNA)。
预变性:95℃,10分钟(激活Hot-Start Taq酶)。
扩增循环:通常为40个循环,每个循环包括变性(95℃,15秒) 和 退火/延伸(60℃,45秒),仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测:仪器实时监测荧光信号变化,生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值:仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数(Ct值)。
结果判定:
阳性:样本Ct值 ≤ 37(具体阈值请以试剂盒说明书为准),且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性:样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效:阳性对照无Ct值或Ct值 > 35,或阴性对照有Ct值,需重新检测。
关键字: 克柔假丝酵母;检测试剂盒;
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