产品介绍:

埃柯病毒 30 型属于肠道病毒 B 组(EV-B),是引起无菌性脑膜炎、脑炎和发热性疾病的常见病原体,尤其在夏秋季容易引发聚集性疫情。由于其临床症状与其他肠道病毒感染(如柯萨奇病毒)相似,且大部分感染为隐性感染,实验室的精准核酸检测对于确诊和流行病学调查至关重要。
产品名称 | 埃柯病毒 30 型核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3302 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
1. 检测原理与技术

该试剂盒主要基于实时荧光定量 RT-PCR(qRT-PCR)技术,通常采用 TaqMan 荧光探针法。
核心机制:
RNA 提取:从咽拭子、粪便、脑脊液(CSF)或疱疹液等样本中提取病毒的 RNA。
逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR):针对 E-30 基因组中高度保守的区域(通常是 VP1 基因)设计特异性引物和探针。
内标质控:试剂盒通常包含内源性内标(如人源基因),用于监控样本采集质量和扩增过程,防止假阴性。
优势:能够特异性识别 E-30,区分于其他埃柯病毒型别(如 E-6、E-9、E-11 等)以及其他肠道病毒(如 EV71、CVA16)。
2. 试剂盒特点与性能

这类试剂盒专为肠道病毒分型诊断设计,具有以下显著特点:
性能维度 描述
特异性 极高。针对 E-30 VP1 基因保守区设计,极少与其他呼吸道病毒(如流感、RSV)或肠道病毒发生交叉反应。
灵敏度 高。最低检测限通常可达 1×10³ copies/mL,能有效检测出低病毒载量的样本。
临床价值 鉴别诊断。用于区分 E-30 引起的脑膜炎与细菌性脑膜炎,指导临床治疗。
检测速度 快速。整个检测流程(含核酸提取)通常在 2-3 小时 内完成。
3. 适用样本与应用场景

适用样本:
咽拭子/肛拭子:用于早期筛查和疫情监测。
脑脊液(CSF):用于确诊无菌性脑膜炎/脑炎的病原体。
粪便/疱疹液:用于病原体确认。
应用场景:
突发公卫事件:在夏秋季肠道病毒高发期,用于聚集性疫情的病原体确认。
中枢神经系统感染诊断:对不明原因发热、头痛、脑膜刺激征患者进行病原学筛查。
鉴别诊断:区分细菌感染与病毒感染,避免抗生素滥用。
4.操作注意事项

样本采集:咽拭子应在发病早期(急性期)采集,脑脊液样本需严格无菌操作。
防污染:RT-PCR 检测极其灵敏,必须严格分区操作,防止扩增产物污染导致假阳性。
结果解读:
阳性:提示存在 E-30 现症感染。
阴性:结合临床症状,若高度疑似但首次阴性,建议复查或更换样本类型(如从咽拭子改为粪便)。
总结:埃柯病毒 30 型核酸检测试剂盒是精准诊断 E-30 感染的关键工具,它通过高特异性的分子诊断技术,解决了传统病毒培养耗时长(3-7 天)、效率低的难题,为临床救治和公共卫生防控提供了科学依据。
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操作步骤:

整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑,核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本:鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解:将拭子浸入裂解液,充分混匀后室温静置10分钟。
提取:采用磁珠法或离心柱法提取总RNA,严格按照试剂盒说明书操作。
保存:洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备:在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积,通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系:例如,使用20μL体系的试剂盒,可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL(具体体积请以实际说明书为准)。
分装:将配好的反应体系分装至PCR反应管中(如20μL/管)。
加样:在样本处理区,分别向反应管中加入5μL的模板RNA(样本、阳性质控、阴性质控)。盖紧管盖,短暂离心,避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序:将反应管放入荧光定量PCR仪,运行预设程序。典型程序包括:
逆转录:50℃,15分钟(将RNA逆转录为cDNA)。
预变性:95℃,10分钟(激活Hot-Start Taq酶)。
扩增循环:通常为40个循环,每个循环包括变性(95℃,15秒) 和 退火/延伸(60℃,45秒),仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测:仪器实时监测荧光信号变化,生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值:仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数(Ct值)。
结果判定:
阳性:样本Ct值 ≤ 37(具体阈值请以试剂盒说明书为准),且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性:样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效:阳性对照无Ct值或Ct值 > 35,或阴性对照有Ct值,需重新检测。
关键字: 埃柯病毒 30 型;检测试剂盒;
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