甲型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 甲型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Hepatitis A Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4506 |
检测原理
RNA提取：样本中HAV RNA经裂解、纯化后获得。
反转录（RT）：提取的RNA通过逆转录酶合成cDNA。
荧光定量PCR（qPCR）：
采用 SYBR Green I 染料法，特异性引物扩增HAV靶基因（如5'-UTR保守区）。
染料与双链DNA结合后发射荧光信号，实时监测扩增曲线，通过 Ct值 定量病毒载量。
检测靶标
基因区域：HAV 5'-UTR 非编码区（高保守区）
覆盖亚型：I型（人源主要型别）、III型等常见致病型
性能参数
| 项目 | 参数值 |
| 检测限（LoD） | ≤ 50 IU/mL（国际单位） |
| 线性范围 | 10² ~ 10⁸ copies/mL |
| 特异性 | 不与乙型肝炎、戊型肝炎、轮状病毒等交叉反应 |
| 重复性 | CV ≤ 5%（批内/批间） |
适用样本类型
血清、血浆
粪便悬液（需特殊前处理）
环境样本（如水源、食品表面拭子）
试剂盒组分
| 组分名称 | 96测试/盒 | 功能说明 |
| HAV qPCR反应液（预混） | 1管 | 含SYBR Green I、dNTPs、酶 |
| HAV引物混合液 | 1管 | 特异性扩增引物 |
| RT反应酶 | 1管 | 反转录酶、RNA酶抑制剂 |
| 阳性对照（HAV RNA） | 1管 | 定量标准品（1×10⁵ IU/mL）|
| 阴性对照（无核酸水） | 1管 | 监测污染 |
| RNase-Free纯水 | 1管 | 稀释/空白对照 |
实验流程概要
RNA提取：使用兼容的RNA提取试剂盒（需另购）。
RT反应：42℃ 15 min → 85℃ 5 sec（灭活酶）。
qPCR扩增：
反应体系：20 μL（含cDNA 2 μL）
扩增程序：
95℃ 3 min
→ 95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（40个循环）
→ 熔解曲线分析（60℃~95℃，0.5℃/sec）
结果判读
阳性：
Ct值 ≤ 38.0，且熔解曲线峰值温度符合预期（如82±1℃）。
阴性：
Ct值 = Undetermined，或无特异性熔解峰。
无效：
阳性对照Ct值＞38 / 阴性对照出现扩增 → 实验重做。
注意事项
实验需在PCR洁净实验室（分区操作）进行，防止气溶胶污染。
熔解曲线分析是区分非特异性扩增的关键步骤。
临床诊断需结合血清学指标（如抗-HAV IgM）。
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