检验原理
技术基础：采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对化脓性链球菌基因组高度保守区域设计特异性引物，通过体外扩增靶标核酸并释放荧光信号，实现定性及定量检测。
灵敏度与特异性：引物经优化可避免与其他微生物DNA交叉反应，检测限低至10^2拷贝/μL，线性范围覆盖5个数量级。
对照设置：含阳性对照（非活体DNA片段）和阴性对照（NTC），用于结果判读及污染监控。
产品名称
化脓性链球菌（酿脓链球菌）染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Streptococcus pyogenes Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4388
主要组分
预混液（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料）
化脓性链球菌特异性引物对
阳性对照（10^8拷贝/μL）
荧光PCR专用模板稀释液
RNase-free超纯水
操作流程
1. 样本处理
临床样本（如咽拭子、脓液）：需提取DNA后使用。
对照稀释：按10倍梯度稀释阳性对照（10^2-10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 反应体系配置（20 μL/孔）
| 组分 | 体积（μL） |
| 预混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 超纯水 | 6 |
3. PCR程序（以ABI 7500为例）
预变性：95℃ 3分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）
熔解曲线分析：60℃至95℃，升温速率0.3℃/秒
4. 结果分析
定性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一判为阳性。
定量：通过标准曲线计算模板浓度。
注意事项
避免反复冻融试剂，解冻后需离心混匀并置于冰上。
实验分区操作（样本处理、PCR配置、扩增区），防止气溶胶污染。
建议设置3次技术重复及阴性对照。
储存与有效期
-20℃避光保存，有效期12个月。
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