检测原理
基于SYBR Green染料法的实时荧光定量PCR技术,针对轻型链球菌特异性基因保守区域设计引物,通过荧光信号实时监测核酸扩增,实现定性和定量检测。
产品名称
轻型链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Streptococcus mitis Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4392
试剂盒组成
预混液:含SYBR Green荧光染料、dNTPs、Taq DNA聚合酶及优化缓冲体系。
引物混合液:轻型链球菌特异性引物(冻干或液体形式)。
阳性对照:已知拷贝数的轻型链球菌DNA片段(非活体样本)。
阴性对照:无核酸酶水。
模板稀释液:用于标准品梯度稀释(若需定量)。
操作步骤
1. 样本前处理
临床样本(如咽拭子、血液、分泌物):按标准核酸提取流程提取DNA。
环境/食品样本:需预增菌后提取DNA。
2. 反应体系配置(20 μL体系)
| 组分 | 体积(μL) |
| 预混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 无核酸酶水 | 补至20 |
3. PCR程序设置
预变性:95℃ 5分钟;
循环阶段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(荧光采集);
熔解曲线分析:60℃~95℃,每0.5℃升温,持续5秒。
质量控制
阳性对照:应出现典型扩增曲线,Ct值≤30。
阴性对照:无扩增信号(Ct值≥40或无信号)。
熔解曲线:单一峰表明特异性扩增。
注意事项
操作需在无菌环境下进行,避免交叉污染。
试剂解冻后需短暂离心混匀,避免反复冻融。
定量分析时需制备标准曲线(建议5个对数梯度稀释)。
储存与有效期
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
有效期:12个月。
性能参数
灵敏度:≤100拷贝/反应。
特异性:不与A组/B组链球菌或其他常见病原体交叉反应。
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