检测原理

基于SYBR Green荧光染料法,通过特异性引物靶向GBS基因高度保守区域,实时监测扩增荧光信号,实现核酸的定性与定量分析。
产品名称 | 无乳链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Streptococcus agalactiae Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4401 |

试剂盒组成

预混液:含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料(即开即用)。
引物混合液:针对GBS优化的特异性引物对。
阳性对照:GBS DNA片段(已知拷贝数,需按梯度稀释使用)。
阴性对照:无核酸酶水。
模板稀释液:用于标准品或样本的梯度稀释。
操作步骤

1. 样本前处理
临床样本(如阴道分泌物、尿液、血液):需提取DNA,建议使用商业化核酸提取试剂盒。
质量控制:提取后DNA建议测定浓度及纯度(A260/A280比值1.8-2.0)。
2. 反应体系配制(20μL体系)
| 组分 | 体积(μL) |
| 预混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 无核酸酶水 | 6 |
3. PCR扩增程序
预变性:95℃ 5分钟;
循环阶段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析:60℃至95℃,每0.5℃递增,持续5秒。
结果判读
阳性:Ct值≤35,且熔解曲线呈现单一峰值;
阴性:无Ct值或Ct值>35,熔解曲线无特异峰;
注意事项:需同时满足阴性对照无信号、阳性对照Ct值在预期范围内。
性能参数

灵敏度:最低检测限为10拷贝/μL;
特异性:不与A组链球菌、金黄色葡萄球菌等常见病原体交叉反应;
线性范围:10^1-10^7拷贝/μL(R²≥0.99)。
储存与运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融(有效期12个月);
运输条件:冰袋或干冰运输。
注意事项

实验分区操作,避免气溶胶污染;
建议设置3次技术重复及阴性/阳性对照;
熔解曲线分析需排除引物二聚体干扰。
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关键字: 无乳链球菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;