技术原理

采用SYBR Green染料法,通过实时监测双链DNA结合染料的荧光信号,定量检测犬链球菌特异性DNA片段。引物针对Streptococcus canis保守序列设计,确保高特异性。
产品名称 | 犬链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Streptococcus canis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4395 |

产品特点

即开即用:预混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、酶等),仅需提供样品DNA模板。
高灵敏度:检测下限可达100拷贝/反应,线性范围≥5个数量级(10^1-10^6拷贝/μL)。
质控保障:含无传染性阳性对照DNA片段(浓度1×10^8拷贝/μL),避免假阴性。
兼容性:适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。
操作步骤

1. 标准曲线制备(以6个10倍稀释梯度为例):
标记离心管(6-1号),每管加45μL专用稀释液。
取5μL阳性对照(1×10^8拷贝/μL)加入6号管,震荡混匀得1×10^7拷贝/μL标准品,依次稀释至1×10^2拷贝/μL。
2. PCR反应体系(示例):
| 组分 | 体积(μL) |
| 2× qPCR Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| ddH₂O | 6 |
3. 程序设置:
预变性:95℃ 5min
循环:95℃ 10s → 60℃ 30s(40循环,采集荧光)
熔解曲线分析:60℃-95℃,升温速率0.5℃/s
注意事项

标准品稀释需在独立区域操作,避免交叉污染。
建议使用带滤芯枪头,所有离心管/板应无菌无DNA酶。
熔解曲线需呈现单一峰形,否则可能存在非特异性扩增。
结果判读
定性:Ct值≤35且熔解曲线符合预期判为阳性。
定量:根据标准曲线计算样品拷贝数。
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关键字: 犬链球菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;