乳突类圆线虫染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 乳突类圆线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Strongyloides papillosus Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4594 |
产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于乳突类圆线虫（Strongyloides stercoralis）DNA的定性与定量检测。通过优化引物和探针设计，确保高灵敏度和特异性，适用于科研用途。
试剂盒组成
PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green），50次反应（20μL/次）。
阳性对照：冻干品，浓度为1×10^8拷贝/μL，需用配套稀释液复溶。
阴性对照：无DNA模板的缓冲液。
标准品系列：预稀释的梯度标准品（1×10^7至1×10^2拷贝/μL），用于建立标准曲线。
DNA提取辅助试剂（可选）：与常见核酸纯化方法兼容。
操作步骤
标准曲线制备
标记6管离心管（7至2号），每管加入45μL专用稀释液。
取5μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL）加入7号管，震荡混匀得1×10^7拷贝/μL标准品，依次稀释至1×10^2拷贝/μL（梯度稀释法）。
样本DNA制备
使用商业核酸提取试剂盒或自选方法纯化样本DNA。
设立阴性对照（无模板）和阳性对照（试剂盒提供）。
qPCR反应体系
反应体系（20μL）：
预混液10μL
引物探针混合液2μL
模板DNA 2μL
无核酸酶水补至20μL
扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
注意事项
加样顺序：建议先加阴性对照、待测样本，最后加阳性对照，避免交叉污染。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
质量控制：若标准曲线R²值＜0.98或扩增效率超出90%~110%，需重复实验。
性能参数
灵敏度：最低检测限为10拷贝/μL。
特异性：不与常见寄生虫DNA发生交叉反应。
线性范围：1×10^2~1×10^7拷贝/μL（定量检测）。
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