Biotin标记的CD30抗体
原理特点
本抗体通过生物素（Biotin）共价标记制备，依托生物素-亲和素级联放大系统原理，可结合标记亲和素的荧光或酶底物，实现信号多级放大。抗体特异性识别肿瘤坏死因子受体超家族成员CD30蛋白，该蛋白主要表达于活化T细胞、B细胞及霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤肿瘤细胞，是淋巴瘤诊断与分型的关键标志物。该标记方式灵敏度极高、背景干净，适配免疫组化、ELISA、免疫印迹等多种实验，可实现低丰度CD30蛋白的精准检测。
英文名称:CD30 Rabbit pAb, Biotin conjugated
中文名称:Biotin标记的CD30抗体
英文别名：CD 30; CD30 antigen; CD30L receptor; Cytokine receptor CD30; D1S166E; KI 1; Ki 1 antigen; Ki-1 antigen; KI1; Lymphocyte activation antigen CD30; TNFRSF 8; TNFRSF8; TNR8_HUMAN; Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Member 8; Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Member 8.
标记物：Biotin（生物素，适配链霉亲和素荧光 / 酶显色放大系统）
靶蛋白：CD30（TNFRSF8，120kDaⅠ 型跨膜糖蛋白，Ki-1 抗原）
经典克隆：BerH8（鼠源 IgG1 κ）
种属：人
验证应用：流式、免疫组化 IHC、WB、免疫荧光
蛋白功能：淋巴细胞活化标志物，霍奇金淋巴瘤、间变大细胞淋巴瘤特征标志物
检测优势：生物素标记可信号放大，适合弱表达抗原检测
储存：4℃避光保存
靶点背景
1. CD30 属于肿瘤坏死因子受体超家族，主要表达于活化 T/B 淋巴细胞、霍奇金淋巴瘤细胞
2. 调控淋巴细胞增殖、凋亡与存活，异常高表达是淋巴瘤特征性分子表型
3. 用于淋巴瘤病理分型、免疫表型鉴定、靶向治疗靶点验证
样本处理与实验操作
1. Western Blot（免疫印迹）
样本制备
细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度
组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致
变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样
抗体孵育
转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时
一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中
TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时
再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像
2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）
样本前处理
脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗
抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温
封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟
抗体孵育
一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发
次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟
PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片
3. ICC/IF（细胞免疫荧光）
样本制备
细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟
通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次
封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合
抗体孵育
一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时
PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟
再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像
4. ELISA（酶联免疫吸附试验）
包被与封闭
用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜
弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时
抗体孵育
一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜
PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时
洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值
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