本试剂盒基于间接ELISA检测原理，酶标板微孔固相包被纯化的军团菌特异性抗原，加入待测样本与标准品后，样本内的军团菌IgG抗体可与固相抗原特异性结合，洗板去除未结合成分，随后加入酶标记抗人IgG抗体，与结合在抗原上的IgG抗体特异性反应，孵育洗涤后加入显色底物，在酶的催化下产生有色产物，终止显色后测定吸光度，通过标准曲线拟合，精准测定样本中军团菌抗体IgG的含量。
基本参数：
产品名称：人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)ELISA试剂盒
英文名称：LP Ab-IgG Elisa Kit
货号：Y-E598
规格：48T/96T
灵敏度：最低可检出抗体浓度 0.25AU/mL
检测范围：0.5–16AU/mL
反应时间：一抗孵育 75min，二抗 50min，底物显色 12min，总流程 145min
保存条件：试剂盒 2–8℃避光；已稀释好的工作液当日用完不可留存
显色系统：HRP 标记二抗催化 TMB 显色
检测波长：450nm，参比 620nm
标准曲线绘制：标准品 6 个梯度浓度，OD 值采用线性回归拟合曲线计算样本抗体含量
注意事项：加样顺序不可颠倒；显色时间严格把控，超时会造成背景偏高；标本需离心去除红细胞杂质
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
样本采集处理
外周血样本常温放置 40min 析出血清，3500rpm 离心 12min 吸取上清；胸水、肺泡灌洗液样本需过滤除菌后再离心取上清，样本避免微生物污染。
试剂解冻稀释
试剂盒全部试剂室温回温 28min；20× 浓缩洗涤液按照 1:19 比例稀释为 1× 工作洗涤液，搅拌均匀备用。
标准品系列稀释
冻干 IgG 标准品加稀释液溶解定容，做 6 组倍比稀释，各梯度标准品依次加入对应微孔 50μL，设置阴性对照孔与空白对照孔。
样本共孵育加液
待测样本孔加入样本 50μL，同步加入酶标记抗人 IgG 结合液 50μL，封板密封，37℃水浴恒温孵育 70min。
洗板洗涤步骤
倾倒孔内液体，每孔加满洗涤液浸润 35s，拍干，循环洗板 6 次，最后一次洗板后充分扣干微孔残留液体。
底物显色操作
每孔添加 TMB 显色液 100μL，避光环境 37℃孵育 18min，观察微孔液体变为浅蓝色即可进入终止步骤。
终止读值计算
加入终止液终止显色，450nm 波长测定吸光度，依托标准曲线计算样本军团菌 IgG 抗体含量，超出曲线范围样本需稀释复测。
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