本试剂盒基于间接ELISA检测原理,将纯化的人IgA抗原包被在酶标板固相微孔内,加入待测样本,样本中的抗IgA抗体可与固相IgA抗原特异性结合,洗板去除未结合成分后,加入酶标记的抗人二抗与之结合,经显色、终止反应后,通过酶标仪检测吸光度,结合标准曲线计算样本中人抗IgA抗体的浓度。
基本参数:

产品名称:人抗IgA抗体(anti-IgA-Ab)ELISA试剂盒
英文名称:anti-IgA antibody Elisa Kit
货号:Y-E454
规格:48T/96T
灵敏度:0.09μg/mL
检测范围:0.18–9μg/mL
反应时间:包被板结合样本 65min,二抗孵育 35min,显色 13min,总 113min
保存条件:所有液体组分 2~8℃,冻干标准品复溶后分装冻存
显色系统:TMB 底物显色
检测波长:450/620nm
标准曲线绘制:5 点浓度梯度,四参数 Logistic 拟合曲线定量
注意事项:IgA 缺乏症样本易出现异常结果;复溶标准品避免剧烈震荡
关键注意事项:

本试剂盒仅科研体外检测,严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射,TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用,杜绝交叉污染;所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃,温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分,残液会造成非特异性结合,背景偏高。
终止后需快速读数,放置过久吸光度会漂移,结果失真。
终止液含稀硫酸,避免接触皮肤、眼睛,若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2~8℃冷链,严禁高温暴晒。
实验步骤如下:

样本前处理
静脉血分离血清,浑浊样本 12000rpm 离心 10min 取上清,分装冻存样本标注日期,避免交叉污染。
试剂室温适配
整套试剂室温放置 28min,浓缩洗涤液用纯水稀释,搅拌均匀,当日用完稀释液。
标准品梯度加样
抗 IgA 抗体标准品溶解稀释成梯度浓度,每标准孔加入 50μL 稀释液,空白孔仅加缓冲液。
一步法孵育加液
待测样本 50μL,同步加入标记 IgA 抗原工作液 50μL,密封酶标板,37℃孵育 58min。
洗板除杂操作
弃液后洗涤液加满微孔浸泡 35s,拍干,循环洗板 5 次,防止残留游离蛋白。
显色避光培育
添加 TMB 显色液 100μL,遮光 37℃反应 16min,控制显色时长一致。
终止检测定量
终止液终止反应,酶标仪 450nm 读数,标准曲线计算样本抗体浓度。
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