本试剂盒采用间接ELISA检测原理，将纯化的Mi2抗原固定包被于酶标板微孔中，封闭非特异性位点后加入待测样本，样本内的抗Mi2抗体与固相Mi2抗原特异性结合，洗板除去未结合物质，加入酶标记抗人免疫球蛋白二抗孵育结合，通过底物显色、终止反应后检测吸光度，依托标准曲线精准定量样本中抗Mi2抗体含量。
基本参数：
产品名称：人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)ELISA试剂盒
英文名称：anti-Mi2-antibody Elisa Kit
货号：Y-E452
规格：48T/96T
灵敏度：临界值 0.17OD
检测范围：定量 1–30RU/mL
反应时间：样本孵育 80min，二抗 55min，显色 15min，合计 150min
保存条件：2～8℃冷藏，终止液常温密封保存即可
显色系统：HRP-TMB 显色体系
检测波长：450nm
标准曲线绘制：6 梯度校准品拟合标准曲线，换算 RU 单位
注意事项：样本不可反复冻融超过 2 次；每批次实验必须同步做阴阳性对照
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
样本离心处理
血清样本 3500r/min 离心 12min 取上清，无法立即检测分装 - 20℃冷冻保存。
试剂回温稀释
所有试剂室温放置 30min，浓缩洗涤液蒸馏水稀释配比完成，混匀待用。
标准品系列配制
Mi2 抗体标准品复溶后梯度稀释 7 个浓度，每标准孔加样 50μL，设置空白对照。
一步法加样温育
待测样本 50μL，加入生物素标记 Mi2 抗原 50μL，封板密封，37℃孵育 65min。
洗板去除未结合物
弃净液体，洗涤液浸泡 30s 拍干，重复洗板 5 次，吸水纸彻底吸干。
酶结合与显色
加入链霉亲和素 - HRP 孵育 25min，洗板后加显色液避光显色 15min。
终止读数定量
终止液终止反应，450nm 测吸光度，绘制标准曲线计算抗体浓度。
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